Состав грунтовки для стен своими руками
Чем можно заменить магазинную грунтовку: рецепт, как недорого приготовить качественный грунт на основе ПВА своими руками дома за несколько минут
Ни один ремонт не обходится без использования строительных смесей и материалов. Все они выполняют особую роль. К примеру, грунтовка улучшает сцепление штукатурки, краски и обоев с поверхностью стен. Продается она в любом строительном магазине. Но при желании ее можно приготовить и дома с помощью клея ПВА. Как сделать грунтовку своими руками? Об этом далее.
Изготовление самодельной грунтовки на основе ПВА
Грунтовка – популярная строительная смесь, незаменима при выполнении чистовых и черновых работ: выравнивании стен, утеплении, шпатлевке, покраске, поклейке обоев. Ее применение гарантирует качество и долговечность выполненного ремонта.
На магазинных полках представлены различные виды смесей. Но при желании изготовить похожий состав можно и в домашних условиях, и за меньшие деньги. Как показывает практика, популярностью пользуется грунтовка с водозащитными свойствами глубокого проникновения, созданная на основе ПВА.
Зачем нужна грунтовка для стен
Ввязываясь в ремонт впервые, люди не уделяют должного внимания грунтовке, поскольку не знают характеристик и не подозревают насколько велика ее роль в отделке. Поэтому часто игнорируют строительную смесь, а зря. Если основание, подготовленное под поклейку обоев, оставить без грунтовочного слоя, оно будет шероховатым, заметить этот изъян можно лишь при близком рассмотрении. Такие дефекты — причина нарушения гладкости обоев и непрезентабельности помещений.
Но предназначение строительной смеси не только в достижении ровной поверхности. Она с успехом применяется и в других целях, в зависимости от вида и состава используемого материала. Преимущества грунтовки в том, что она:
- дает на выходе гладкое и качественное основание;
- делает поверхность крепкой и прочной;
- способствует легкому нанесению красящих и иных веществ;
- маскирует дефекты стен;
- делает глянцевые покрытия блестящими.
Чем можно заменить магазинные аналоги
Грунтовку можно не только собственноручно нанести на стену, но и создать. Обычно состав смесей разных производителей схож. На рынке стройматериалов можно приобрести компоненты, упомянутые на этикетке заводской продукции. Из этих ингредиентов можно легко создать продукт, который по качеству и характеристикам не будет уступать магазинным аналогам.
Зачем создавать грунтовку своими руками если в магазинах представлен огромный их ассортимент? Во-первых, это позволит сэкономить финансы. Не придется переплачивать за упаковку и бренд. Вместо магазинной грунтовки получится домашняя, которая ничуть не хуже. А, во-вторых, кому-то эта затея покажется заманчивой – изготовить строительную смесь своими руками.
Компоненты для приготовления состава можно купить на строительном рынке. Продукт делается в считанные минуты, после чего он сразу готов к нанесению. Единственно важное условие – выверять правильные пропорции в процессе изготовления.
Как сделать грунтовку для стен своими руками: рецепт, как сделать из ПВА
Самая востребованная строительная смесь – грунтовка глубокого проникновения. Это обусловлено тем, что любой домовладелец хочет по максимуму защитить стены своего жилья, а как сделать это лучшим образом, если не изнутри. Такая смесь изготавливается на основе клея ПВА, обеспечивающего водонепроницаемость оснований.
Данный компонент требует более детального рассмотрения. ПВА используется не только для нужд канцелярии. Еще существуют строительные смеси, которые выступают в качестве добавок к цементным и прочим составам для повышения их пластичности и гидрофобности. Кроме того, ПВА бывает мебельным, столярным, класса «люкс», «экстра» — то есть на любой вкус и цвет.
Однако для изготовления грунтовки подойдет лишь строительный клей. И чтобы на выходе получить качественную смесь, ПВА следует использовать в качестве добавки, а не основного компонента.
Как приготовить
Для приготовления смеси на основе клея потребуются следующие компоненты:
- вода – 8 литров;
- строительный ПВА – 1 литр;
- цемент – 1 мастерок.
Чтобы приготовить смесь своими руками:
- смешайте ПВА с водой до получения однородного состава;
- высыпьте цемент и снова перемесите массу;
- процедите состав через марлю, сложенную в два раза и нанесите на поверхность.
Цемент можно заменить на порошковый мел. Грунтовка должна ложиться на стены легко и равномерно, оставляя слегка заметный белый след.
Прежде чем нанести смесь на всю поверхность, опробуйте ее на небольшом и незаметном участке. Если после высыхания стена не покрылась пленкой, значит пропорции выверены правильно. Если же на поверхности образовалась пленка, добавьте в смесь больше воды.
Домашняя грунтовка на основе ПВА не только проникает глубоко в стены, делая их влагонепроницаемыми, но еще и оказывает антисептическое действие не хуже любого магазинного аналога.
Как разводить ПВА для разных поверхностей
При правильном разведении ПВА образуемая пленка после высыхания не должна быть заметной. Это касается всех поверхностей. Если добавить в воду клей в избытке, то слой грунтовки после нанесения превратится в водонепроницаемую эластичную пленку, которая в дальнейшем может отслоиться от стены вместе с отделочным материалом.
Если ПВА будет чересчур много, грунтовка отстанет от основания гораздо быстрее из-за собственной тяжести. Случается, что грунтовка с превышенным содержанием клея не отслаивается, но с течением времени ПВА может пожелтеть и тогда под светлым финишным покрытием будут просматриваться неприглядные пятна.
Особенности нанесения
Грунтовка стен выполняется быстро даже в том случае, если нет соответствующего опыта. Для качественного проведения работ рекомендуется соблюдать следующие правила:
- Перед грунтовкой необходимо подготовить рабочую поверхность, а именно очистить ее от старого покрытия, краски, загрязнений и пыли.
- Для удобства перелейте смесь в специальную емкость и обработайте стены с помощью кисти либо валика. В первую очередь следует обработать углы и труднодоступные участки.
- Движения должны быть сверху вниз.
- После высыхания первого слоя нанесите второй. Это обеспечит надежное сцепление и позволит перейти к выполнению декоративных работ.
Не стоит использовать распылитесь при нанесении грунта, иначе вся мебель и прочие предметы интерьера будут испорчены.
Если в процессе ремонта под рукой не оказалось грунтовки, то не стоит сразу бежать в магазин. Сделайте смесь дома. Если четко следовать рецептуре, получится качественный продукт. Простая в приготовлении – грунтовка глубокого проникновения на основе ПВА. Главное условие в процессе ее создания – соблюдение пропорций, указанных в рецепте.
Полезное видео
Грунтовка для стен своими руками
Грунтовка – крайне необходимая смесь в строительстве, она используется практически во всех видах ремонтных работ. Только с ее использованием можно говорить о качестве и долговечности проделанной работы.
На прилавках магазинов можно найти разные виды грунтовки, которые предназначаются для разных работ, но все их можно сделать в домашних условиях, поэтому ниже будет представлен состав грунтовки для стен, используемый в разных видах работ.
Виды грунтовок
Подобный материал различается по сфере применения и своим воздействиям, поэтому нужно выделить основные виды:
№ | Вид грунтовки | Описание |
---|---|---|
1 | Для лучшей адгезии | Используется для того, чтобы надежно закрепить отделочные материалы к стене. |
2 | Для прочности | Применяется, если необходимо отремонтировать или провести реставрацию старых построек, а также может быть использована смесь для пористых сыпучих материалов. |
3 | Глубокого проникновения | Позволяют создать водоотталкивающий эффект, создается закупорка пор в основании, но не нарушается вентиляция. |
Грунтовочный состав улучшит адгезию основания
Кроме основного применения грунтовки практически любая смесь оказывает антикоррозийные свойства и является антисептиком. Если добавлять в смесь определенные составляющие, то можно сделать обработанную поверхность, которая не будет подвергаться возгоранию.
Все характеристики материала зависят от составляющих, но при самостоятельном приготовлении можно увеличить или уменьшить те и иные показатели.
Все рецепты, что позволяют создать смесь в домашних условиях, очень легко готовятся и будут экономить приличную сумму средств, особенно если ремонт масштабный.
Невзирая на самостоятельное приготовление, смесь не будет ничем уступать магазинным аналогам, основное, что необходимо – это правильно соблюдать пропорции.
Все растворы, которые созданы в домашних условиях, нужно применять на протяжении суток, в противном случае многие из них теряют свои качества.
Грунт для улучшения адгезии
Данный раствор может быть нанесен на любую поверхность, даже если она глянцевая. Использовать ее можно для обработки металла, труб и прочих поверхностей.
За счет мела отделочный материал будет отлично схватываться со стеной.
Итак, для приготовления потребуется:- мыло хозяйственное – 1 шт;
- малярный клей – 200 гр;
- алюмокалиевые квасцы – 250 гр;
- мел – 2 кг;
- олифа – 30 мл.
Мел необходимо раскрошить
Если не получается купить порошкообразный мел, то нужно будет раскрошить обычный.
Главное, чтобы он был измельчен до состояния пыли, в противном случае грунт получится некачественным.
Готовится смесь в таре из алюминия по следующим шагам:
- Нужно довести до кипения литр воды и налить ее к алюмокалиевым квасцам.
При растворении мыла можно добавлять олифу
После приготовления нет необходимости процеживать раствор, когда смесь остынет ее можно наносить на стены. Только жидкая смесь будет качественной, поскольку сможет заполнить любые поры.
Грунт для повышения прочности
Применяется данная смесь, когда необходимо проводить утепление стен и потолка в старом помещении. Нередко в старых домах может крошиться кирпич, но разбирать и строить новые стены не имеет смысла, поскольку они остаются еще достаточно прочными.
Именно в данной ситуации используется грунтовка, которая может укрепить основание. Кроме того, по данному рецепту материал можно использовать для бетонного основания.
Посуду, в которую будет добавляться купорос, используйте только для хозяйственных целей
Для приготовления потребуется:
- столярный клей – 500 мл;
- медный купорос – 100 гр;
- хозяйственное мыло – 1 шт.
Следует заметить, что медный купорос продается в магазинах для сада и огорода. Во время приготовления используется только эмалированная посуда, которая не будет использоваться в дальнейшем для приготовления еды. Другие виды могут вступать в реакцию при варке.
Грунтовка для стен своими руками готовится следующим образом:
- В кастрюлю вливается 7 литров воды, после чего она доводится до кипения.
- Пока вода прогревается, следует натереть мыло на терке, а во время кипения добавить его в воду. Огонь нужно сделать минимальным и во время высыпания мыла постоянно мешать воду деревянным предметом.
Помешивайте раствор деревянной лопаткой
Когда смесь остынет, ее можно наносить на бетонные и кирпичные стены. Она позволит предотвратить появление грибка и плесени, а значит идеально подойдет для погреба, крыш, ванных комнат.
Если, приготавливая смесь, образовались комки, то их следует разбить, используя миксер, и только потом можно процедить состав.
Грунт глубокого проникновения
Смесь глубокого проникновения самая популярная среди остальных видов. Для экономии средств следует знать, как делать грунтовку для стен своими руками. В составе ее будет использовать клей ПВА, который широко распространен в строительстве и речь не только о дереве, но и о добавлении клея к другим смесям, к примеру, добавление в цемент позволяет добиться высокой пластичности и гидрофобности.
Для грунтовки следует использовать только строительный клей ПВА. Его нужно применять только как добавку к раствору, а не как основу. Очень большое количество клея приводит к тому, что после просыхания он будет создавать на стене пленку, которая начнет отслаиваться вместе с отделочными материалами.
Грунтовка должна равномерно ложиться на стены
Для приготовления качественной грунтовки нужно применить:
- клей ПВА – 1 л;
- вода – 8 л;
- цемент – 1 мастерок.
- Клей необходимо смешать с водой и, размешивая, довести консистенцию до однородности.
- Далее, насыпается цемент и тщательно размешивается.
- В конце грунтовка процеживается, используя марлю, а потом можно наносить смесь на стены.
Цемент можно заменить мелом в порошкообразной форме. После нанесения раствора на стену материал должен равномерно ложиться и оставлять еле заметные белые следы. Подробнее о приготовлении смеси глубокого проникновения смотрите в этом видео:
Изначально в тару следует наливать клей, а уже в него добавлять воду, активно все перемешивая.
Прежде чем наносить самодельный грунт на стены, рекомендуется проверить его на незаметном участке. После его просыхания не должно появляться пленки, только в таком случае раствор может использоваться для дальнейшей работы. Если пленка образуется, то грунтовка разбавляется обычной водой.
Правильное нанесение смесей на стены
Грунтовка стен своими руками проводится очень быстро даже без опыта. Для правильного алгоритма рекомендуется использовать следующие правила:
- Стены могут грунтоваться только после их подготовки, а именно очистки от старого покрытия, красок, грязи и пыли.
- Далее, смесь наливается в специальную ванночку и наносится на стены при помощи валика или кисти.
- Смоченной кистью или валиком обрабатывается вся стена, движения должны быть сверху вниз. Не рекомендуется водить по одному месту дважды.
- После полного просыхания нужно повторить алгоритм.
Если раствора оказалось мало, то перед приготовлением новой смеси следует хорошо помыть тару, чтобы в ней не осталось прежнего грунта.
В противном случае могут образоваться комки. Не рекомендуется использовать распылитель для нанесения смеси, в противном случае мебель и другие элементы дизайна будут испорчены за счет сильной липкости грунтовки. Используя представленные в статье рецепты, можно будет добиться создания качественной смеси для стен.
Как сделать грунтовку своими руками: рецепты приготовления в домашних условиях
Чтобы отделочный слой краски или штукатурки продержался на стене как можно дольше, перед началом отделочных работ стену рекомендуется покрывать слоем грунтовки. В строительных супермаркетах на сегодняшний день в продаже находится большое количество различных видов грунтовки от разных производителей. Однако не все знают, как сделать грунтовку своими руками, себестоимость которой будет на порядок ниже, чем у готовой.
Польза от грунтовки
Как было отмечено выше, грунтовка увеличивает срок службы настенного покрытия, улучшая качество сцепления материала с поверхностью стены. Грунтовка представляет собой жидкую смесь, которая наносится на стены равномерным слоем и по мере высыхания создает плотную пленку, на которую хорошо ложится штукатурка, краска, обои и пр. Если с ваших стен сыпется штукатурка, а стены сами по себе рыхлые и ветхие, штукатурка поможет дополнительно их укрепить.
Исходя из того, какие функции должна будет выполнять грунтовка, ее можно разделить на следующие виды:
- Грунтовка для повышения качества сцепления наносимого материала с поверхностью стены;
- Грунтовка для укрепления стен;
- Грунтовка глубокого проникновения с водоотталкивающим и защитным воздействием.
Кроме того, грунтовка обладает антикоррозийными и антисептическими свойствами. В некоторых составах использование дополнительных ингредиентов придает ей кроме прочего огнеупорность.
Следует знать, что обработка рабочей поверхности грунтовкой требуется практически при любых отделочных работах, например при штукатурке пенобетонных и газобетонных стен и покрасочных работах, таких как покраска бетонных полов или шифера.
Перед тем, как приготовить грунтовку в домашних условиях, определитесь с тем, какие функции она должна будет выполнять, так как именно от этого будет зависеть ее состав.
Как самому сделать грунтовку?
Вопрос о том, как сделать грунтовку для стен своими руками, на сегодняшний день волнует многих. Казалось бы, чего проще отправиться в ближайший строительный магазин и приобрести уже готовый раствор? Однако присмотревшись повнимательнее к ценам, вы поймете, что разница есть, при чем весьма ощутимая. Грунтовка состоит из достаточно простых и недорогих компонентов. Самое важное – это правильно подобрать состав и рассчитать количество каждого компонента.
</li> </ul> <p» both=»»>
Пошаговая инструкция, как сделать грунтовку для стен:
- В емкость наберите холодной воды и доведите ее до кипения.
- Хозяйственное мыло предварительно измельчите или натрите на обычной кухонной терке – так вам не придется долго ждать, пока оно полностью раствориться.
- Высыпьте полученную мыльную крошку в кастрюлю, уменьшите огонь до минимального, и несколько минут размешивайте мыло в воде при помощи деревянной лопатки или палки, пока мыло полностью не раствориться.
- Добавьте в получившийся раствор медный купорос и столярный клей.
- Накройте емкость крышкой и оставьте вариться на медленном огне приблизительно на полчаса. Смесь необходимо периодически помешивать, чтобы не допустить образования комочков.
- Через полчаса раствор необходимо снять с огня, немного остудить и процедить еще горячим через сито или несколько слоев марли.
- Когда раствор полностью остынет, его можно начинать наносить на стены.
Как сделать грунтовку глубокого проникновения своими руками?
Для максимальной защиты стен от неблагоприятных условий окружающей среды, используют грунтовку глубокого проникновения, которую чаще всего изготавливают на основе клея ПВА.
Для приготовления штукатурки нам потребуется строительный клей ПВА, который как нельзя лучше справится с задачей повышения прочности стен и их водонепроницаемости. Казалось бы, при столь полезных свойствах строительного клея ПВА им с легкостью можно было бы заменить саму грунтовку. Однако делать этого категорически нельзя. Клей ПВА образует на поверхности влагонепроницаемую пленку, которая со временем может отслоиться вместе со слоем штукатурки. Кроме того, еще со школы вы наверняка помните, что клей ПВА имеет свойство желтеть со временем, что негативно скажется на внешнем виде отделки, в особенности на обоях. Поэтому клей ПВА должен использоваться не как основной компонент, а лишь в качестве добавки.
youtube.com/embed/XNbFKkhDoCs?rel=0″/>
Как сделать грунтовку из клея ПВА?
Сделать грунтовку из клея ПВА очень просто. Для этого потребуется взять:
- 1 часть строительного клея ПВА;
- 8 частей воды;
- Немного цемента.
Все что необходимо будет сделать, это смешать клей с водой, добавить в смесь цемент, хорошенько все перемешать, а затем процедить через сито или марлю. Преимуществом данного способа приготовления грунтовки является его простота и удобство, а также отсутствие необходимости затрачивать время на то, чтобы вначале довести смесь до кипения, затем сварить, а потом еще и дождаться, пока смесь остынет. Грунтовка на основе ПВХ будет готова к употреблению сразу после того, как вы процедите раствор. Единственный ее минус заключается в том, что храниться она может не более суток, так что запастись самодельной грунтовкой на основе ПВА впрок не получится.
Грунтовка из ПВА своими руками
Существует небольшая хитрость, как можно определить, правильную ли пропорцию клея, воды и цемента вы использовали. Перед тем, как приступить непосредственно к обработке грунтовкой стен, нанесите самодельный раствор на небольшой участок и дайте ему высохнуть. Если в результате на поверхности данного участка не образовалась плотная пленка, значит пропорции были взяты верно и можно приступать к грунтовке.
Как самому приготовить грунтовку по дереву?
Среди прочих материалов обработка дерева является, пожалуй, одной из наиболее сложных задач. В первую очередь необходимо разобраться, в каких случаях дерево вообще необходимо грунтовать, а в каких достаточно будет лишь покрыть поверхность специальной пропиткой.
Грунтовать дерево нужно, если:
- Деревянная поверхность является частью наружного фасада здания или соприкасается с наружными стенами;
- Если на деревянной поверхности присутствую дефекты, которые нельзя удалить без использования шпаклевки и скрыть без дальнейшего окрашивания;
- Если деревянная поверхность расположена в сыром и неотапливаемом помещении;
- Если дерево планируется в дальнейшем покрыть слоем лака или краски.
Для дополнительной защиты деревянных поверхностей используются, как правило, алкидные, акриловые, антисептические и шеллаковые грунтовки, браться за изготовление которых самостоятельно весьма рискованно. Дерево – капризный материал, и экспериментируя на нем с различными грунтовками, вы рискуете его сильно повредить. Поэтому в данном случае лучше приобрести готовую грунтовку.
Как сделать грунтовку под обои?
Некоторым умельцам получается хорошо сэкономить и облегчить себе жизнь, объединив обойный клей и грунтовку в одном растворе. В таком случае обойный клей выступает альтернативой клея ПВА, так как имеет схожие физические свойства и глубину проникновения. Еще одним преимуществом замены клея ПВА на обойный является то, что вам не придется ждать, пока грунтовка высохнет. Вы обрабатываете участок стены обойным клеем и тут же прикладываете к нему лист обоев необходимого размера.
Нанесение грунтовки валиком
В завершении несколько слов о том, как необходимо наносить грунтовку.
- Прежде чем приступать к процессу грунтовки, предварительно необходимо подготовить поверхность: удалить с нее остатки прежнего покрытия, пыль и прочий мусор.
- Грунтовку удобнее всего наносить при помощи валика, окуная его в специальную пластиковую ванночку, которая благодаря наличию особой ребристой поверхности не даст валику впитать лишний раствор. Углы и прочие труднодоступные места удобнее обрабатывать при помощи кисти.
- Специалисты рекомендуют наносить грунтовку одним размашистым движением руки снизу вверх. Нужно стараться нанести ее таким образом, чтобы валик два раза не проходил по одному и тому же месту, иначе слой грунтовки будет неравномерным. Чтобы сделать слой более плотным, дайте первому слою полностью высохнуть, и только после этого наносите поверх него второй и последующие слои.
Грунтовка, сделанная своими руками: экономия и уверенность в качестве
Современные технологии производства могут представить достаточно разнообразный ассортимент грунтовки для пола различного качества, по приемлемой цене и для любого назначения. Но, в определённых ситуациях можно прилично сэкономить деньги и приготовить не самый худший состав своими руками.
Как показывают статистические исследования, наибольшей востребованностью пользуются самодельная акриловая смесь и грунтовка с водозащитными свойствами глубокого проникновения, сделанная на основе ПВА.
Рассмотрим подробнее процессы изготовления этих двух вариантов:
1. Самодельная акриловая грунтовка
Немного окунувшись в историю создания акриловых грунтовок, можно увидеть, что изначально в ней присутствовали всевозможные добавки и пигменты, которые делали её укрывистой по аналогии с настоящей краской. Если покрывать неровный пол такой грунтовкой, то она способна выровнять не только цвет, но и общую структуру.
Для оформления современного декора, такими составами пользуются в основном художественные декораторы для эксклюзивной росписи. Рисунок в помещении, выполненный на светлом тоне подложке, выглядит эффективнее и ярче.
Для классических строительных потребностей подойдёт больше грунтовка без окраски (бесцветная), а создать желаемый тон можно с первым нанесённым слоем краски.
Рецепт акриловой грунтовки своими руками
Основные компоненты, которые входят в состав:
— вода очищенная – 87,10%;
— связующее вещество – 12,0%;
В случае когда связующее вещество не образует пены, то вполне реально можно обойтись без применения пеногасителя. Также, если грунтовку не планируется долго (6–9 дней) хранить, можно не добавлять биоцид, который уничтожает вредителей и бактерии.
Вещество коалесцент обладает свойством понижать минимальное значение температуры, чтобы формировалась плёнка. Когда её значение не больше +6С, его можно не прибавлять в общую массу. Остаётся сделать дисперсию из компонентов и развести нужным количеством воды.
Предположим, нужно загрунтовать определённую площадь пола, который плохо впитывает влагу. Часто, в этом случае, грунтовка собирается в виде толстой плёнки, небольшими пятнами, на поверхности. Такую проблему можно легко исправить путём добавления в состав веществ, обладающим поверхностно-активным действием. Несмотря на сложность формулирования, это довольно легко!
Секрет! К самым лучшим и безопасным поверхностно-активным веществам относится 72% хозяйственное мыло! Есть специальные добавки, но они очень дорогие. Эффективнее использовать мыло, которое стоит копейки!
Мы получили хорошую акриловую грунтовку, которая хорошо держится на обрабатываемой поверхности, из-за хозяйственного мыла.
Хорошо бы улучшить качество и сделать хорошую защиту пола от грибка и плесени следует добавить медный купорос или фунгицид – в итоге проблема решена!
Чтобы подложка лучше впитывала грунтовую смесь, в её основе следует применять связующее вещество с тонкодисперсионной структурой. Только в таком случае можно достигнуть процентного содержания с 13% до 52%.
Суммируя все новые различия, получается ИННОВАЦИОННАЯ РЕЦЕПТУРА АКРИЛОВОЙ ГРУНТОВКИ:
— вода очищенная – 45,6%;
— связующее тонкодисперсионное – 50,1%;
— фунгицид (или медный купорос) – 1,1%;
— поверхностно-активные соединения – 0,4%;
— коалесцент (если нужно) – 2,5%;
— пеногаситель (если есть необходимость) – 0,3%.
Конечно, этот вариант стоит больше, чем классический состав, но по эффективности будет превосходить большинство заводских дорогостоящих вариантов.
2. ПВА-грунтовка своими руками
Если понадобится глубоко проникающая грунтовка за небольшую цену, то её вполне можно изготовить из клея ПВА. Но клей необходимо использовать только из ПВА-строительный, а не канцелярский вариант. Независимо от этого, грунтовка будет стоить во много раз дешевле, чем самая дешёвая покупная (готовая).
Для основания пола, грунтовка с самодельным составом (основанном на ПВА) может создать качественный гидрофобный слой защиты, улучшенную адгезию материалов. Она имеет возможность проникать в глубину структуры материала.
Цена грунтовки напрямую зависит от глубины проникновения в бетонную (деревянную) структуру – чем глубже, тем дороже! Учитывая этот аспект, можно сильно сэкономить, но в качестве придётся незначительно уступить.
Вариант с ПВА-смесью является наиболее бюджетным, в принципе вполне подходит для домашнего строительства (ванная, гараж, кухня).
Инструкция действий
Прежде всего, для приготовления грунтовой смеси, понадобятся: строительный ПВА, перфоратор с миксером и большая ёмкость из пластика. Все работы должны производиться в тёплом помещении.
Наносить грунтовочную смесь рекомендуется использовать плоские кисти, валик с коротким ворсом и пластиковый контейнер, имеющий ребристые края.
Рекомендация! Не делайте сразу большое количество смеси – можно оставить неиспользованной часть приготовленного объёма, и материал пропадёт (затвердеет)!
Для приготовления смеси, нужно налить клей ПВА в пластиковое ведро и маленькими порциями добавлять в него тёплую воду, осуществляя при этом непрерывное перемешивание до получения однородной (сметанообразной) массы.
Компоненты следует брать в таком соотношении: 1 часть воды на 2 части клея. Можно увеличить прочностные характеристики путём добавления смеси просеянного мелкого мела или гипса.
Когда обработке подлежит бетонный пол, в раствор нужно включить цементную «муку» марки не меньше М400.
Заключительные рекомендации
Следует предостеречь от вероятных неприятностей, с которыми может столкнуться мастер при применении состава:
1. Нельзя наливать слишком толстый слой грунтовки, иначе со временем он может отойти от основания вместе с готовым финишным покрытием.
2. Когда планируется красить пол в светлые тона, нужно максимально истончить слой грунтовки. Через полгода тёмный цвет бетона обязательно проявится в виде тёмных разводов и жёлтых пятен.
Используя материалы статьи, можно нехитрым способом осуществить качественный и недорогой монтаж грунтовки под линолеум, плитку, ламинат, краску или любое другое напольное покрытие.
Хотя, в случаях, когда используются собственноручные смеси, качество материала и итог работы, конечно же, снижаются, чем при аналогичном использовании заводского варианта строительной грунтовки.
Грунтовка — ее виды, состав и сфера применение
Почти все строительно отделочные работы выполняются только после обработки поверхности таким материалом, как грунтовка.
Это лакокрасочный материал, т.е. жидкий состав для предварительной обработки поверхностей для последующей отделке. Как вы уже поняли сегодня говорим о грунтовке — ее виды, применение и состав.
Этот материал служит основой для любых отделочных работ. Чтобы вы ни делали, кладете плитку, клеите обои, штукатурите или красите стены, в первую очередь позаботьтесь о тщательной подготовке поверхности, для того, чтобы покрытие служило вам долгие годы.
Грунтовки, в зависимости от типа и назначения, могут проникать в поверхность, укреплять ее, улучшать сцепление материалов с основанием, способствовать равномерному нанесению штукатурки, обойного или плиточного клея, шпатлевки, так же могут уменьшить расход краски и предотвратить появление плесени и грибка.
От правильного выбора зависит качество конечной отделки помещения. Грунтовка, в зависимости от типа и назначения, может иметь сразу несколько из перечисленных выше свойств: проникает в поверхность, улучшает и укрепляет, регулирует пористость основы, улучшает сцепление отделочных материалов с поверхностью.
Конечно, эти отделочные материалы можно нанести и без нее, но риск появления брака (отслаивания, разводов, шелушения) вырастет до такой степени, что грошовая экономия себя не оправдывает.
В ряде случаев, когда работа ведется с проблемными поверхностями, грунтовка оказывается строго обязательной. Ее применение просто необходимо перед нанесением материалов на сложное основание: недостаточно или слишком пористую, пыльную и загрязненную, испачканную гипсом или другими строительными растворными и т.д.
Виды грунтовок
Антикоррозийнные — применяются для того, чтобы не ржавел металл. Для цинка существуют специальные грунтовки. В домашних и бытовых условиях антикоррозионные используются, если заржавела труба в ванной, или появилась ржавчина в гараже.
Антисептические — действие и применение наверное понятны из самого названия. Они предотвращают развитие плесени и грибка.
Пропиточные (глубокопроникающие) — укрепляют поверхность, используются для непрочных, осыпающихся штукатурок или для обработки гипсокартона перед наклеиванием керамической плитки.
Уменьшают впитывающую способность основания, что помогает наносить лакокрасочные материалы равномерно и снизить их расход.
Могут быть и гидрофобными, то есть защищать от влаги. Они применяются как для наружных, так и внутренних работ (есть для оштукатуренных поверхностей или гипсокартона).
В зависимости от качества поверхности могут использоваться как алкидные, так и акриловые. Если после проведения рукой по стене на ладони остается мел, значит штукатурка хрупкая и непрочная.
Следует применять алкидную грунтовку, она отлично пропитывает основание и обеспечивает хорошую адгезию для краски. Если шпаклевка хорошая, тогда можно грунтовать водной грунтовкой.
Фасадные — гидрофобные материалы, которые препятствуют проникновению влаги в основание, например, в штукатурку или бетон, но при этом должны пропускать наружу водяной пар.
Для деревянных деталей снаружи дома желательно применять глубокопроникающие антисептики. Особенно тщательно нужно пропитывать места стыков и срезы. Они наиболее уязвимы, через открытые волокна дерево впитывает влагу на много сильнее. При окрашивании дерева используется алкидно-масляная грунтовка.
Так как у масла хорошая эластичность и проникающая способность. При подготовке деревянного основания под покраску, не стоит использовать олифу: если она будет не качественная, тогда при нагревании могут появиться вздутия и пузыри, изменится тон краски.
Варианты применения:
- Подготовка цементно-известковых и бетонных оснований к шпаклеванию или оштукатуриванию.
- Подготовка оштукатуренной и зашпаклеванной поверхности к покраске, оклейке обоями, пенополистирольными плитами, панелями, керамической плиткой.
- Обработка бетонного пола перед использованием самонивелирующегося раствора или ремонтной шпаклевки.
- Подготовка бетонного пола к укладке линолеума, коврового покрытия, керамической плитки.
- Обработка ДВП, ДСП, гипсокартона, дерева перед шпаклеванием, покраской и т.п.
- Пропитывание швов между керамическими плитками для защиты швов от вымывания водой.
Состав
Грунтовка это эмульсия, то есть смесь полимерной смолы и воды с добавлением смягчающего и разжижающего вещества. Показатели смачиваемости и капилярного проникновения грунтовки выше, чем, например, воды из крана.
Поэтому она легко и глубоко проникает в пористые и рыхлые материалы, заполняет пространство между их твердыми частичками и после испарения воды полимеризуется, обволакивая и склеивая частички, а значит дополнительно цементируя структуру материала.
Подбирайте грунтовку по типу основания на которое она будет наноситься и по типу покрытия. Идеально использовать ґрунтовку одной торговой марки с материалом последующего слоя.
Чтобы ее правильно нанести, следует правильно подобрать. Поверхность должна быть сухой, очищена от пыли и обезжирена.
На металлических деталях не должно быть ржавчины. Деревянные – зачистить шкуркой. Грунт можно наносить как простой кистью, так и валиком или краскопультом.
Обязательно следует дождаться полного высыхания прогрунтованного слоя, обычное время высыхания указано в инструкции к применению. Применяйте грунтовку там, где она необходима и тогда ваш ремонт будет идеальным.
Посмотри видео — как не потеряться при выборе грунтовки:
состав, расход, назначение и использование
Особенности грунтовки глубокого проникновения:
Принцип действия
Виды составов
Сравнение характеристик
Практическое применение
Пол, стены и другие поверхности во время ремонта нужно неоднократно грунтовать. Но не все укрепляющие средства действуют одинаково. Подробно разберемся, что представляет собой и для чего нужна грунтовка глубокого проникновения.
Средство предназначено для обеспыливания и укрепления оснований. В отличие от других грунтовочных смесей, ее частицы способны проникать в материал на глубину до 10 см. Они связывают рыхлую структуру и создают на поверхности слой, который повышает адгезию.
Рецептура разной продукции может существенно отличаться. Но ее основу составляют следующие компоненты:
- Вода. Является разбавителем раствора. Ее доля составляет порядка 80%. Регулирует консистенцию смеси и количество активных компонентов на единицу объема.
- Акрил. Смолы играют роль связующего вещества. Именно они укрепляют материал и создают на поверхности пленку с высокими показателями адгезии.
- Полимеры. Придают жидкости повышенные характеристики капиллярного проницания. Они отвечают за способность частиц как можно глубже впитываться в основание.
Именно акриловые грунтовки глубокого проникновения стали самыми популярными и востребованными у мастеров.
Но кроме основных, есть и дополнительные компоненты. Они расширяют область применения грунта и придают ему новые свойства.
- Антисептики. Противогрибковые компоненты. Их применяют если на поверхности присутствует плесень, грибок и другая бактериальная среда.
- Силиконовые агенты. Отталкивают воду, придают основанию гидроизоляционные свойства.
- Латекс. Повышает адгезионные показатели, применяется при повышенных требованиях к сцеплению слоев между собой.
Грунтовочные средства с добавками одновременно выполняют несколько функций, поэтому их называют универсальными.
В продаже встречаются составляющие, из которых своими руками можно приготовить средства для грунтования. Они будут стоить дешевле готовой заводской продукции. Но на хорошие результаты можно рассчитывать только, если полученная смесь соответствует ГОСТ.
Есть несколько классификаций грунтовочных средств. В зависимости от впитываемости поверхностей, на которые их наносят, выделяют:
- Классический грунт. Подходит для обработки плотных слоев: бетон, штукатурка и т. д.
- Праймер. Служит для предварительной обработки конструкций с рыхлой структурой.
Но большее значение для строителей имеет тип вяжущего, на основе которого изготовлены грунтовочные смеси. Рассмотрим их подробнее.
Акриловые
Являются универсальными, подходят для обработки подавляющего большинства оснований: бетонных, асбестоцементных, деревянных. Продукция имеет большие сроки хранения, а при загустевании может разбавляться водой, количество которой не должно превышать 10%. Важно лишь не просрочить рабочий состав.
Время высыхания составляет пару часов, что становится большим плюсом при сжатых сроках строительства. Состав не способен защитить металлические элементы от коррозии. Может применяться в качестве самостоятельного финишного покрытия после шпаклевания.
Алкидные
Способны взаимодействовать со всеми материалами, используемыми в строительстве.
При нанесении на металл, выполняют функцию преобразователей ржавчины. Создают защитную пленку, которая препятствует повторному появлению коррозии. Подходят для стали и чугуна.
Хорошо зарекомендовали себя для работы с железобетонными конструкциями в панельном домостроении. Повышают адгезию бетона и не дают проступать ржавчине на металлических закладных деталях.
В частном домостроении широко используются для обработки деревянных конструкций: балок перекрытия, элементов стропильных систем. В рецептуре присутствуют латексные частицы. Они скрепляют волокна даже во влажной среде, препятствуя их разбуханию.
Полиуретановые бетоноконтакты
Такие грунтовки глубокого проникновения для бетона используются при обработке невпитывающих поверхностей: окрашенных или монолитных стен. В рецептуру включают цемент и игольчатый кварц. Они делают материалы пригодными к нанесению последующих покрытий.
Продукция не получила широкого распространения. Жидкость сохнет около 12 часов, что замедляет работу. Ее использование оправдано лишь при отделке помещений полимерными смесями.
Силиконовые бетоноконтакты
Относятся к категории праймеров. Хорошо проникают в структуру материала, придают ему высокую прочность. Благодаря этому широко используются в наружной отделке. Применение таких грунтов внутри помещений ограничено из-за токсичности. Работать приходится в респираторах.
Плотность всех составов одинаковая — порядка тонны на кубометр. Поэтому в качестве растворителя используют воду.
Грунты выпускают в виде концентратов или готовой к применению продукции. Первые оказываются дешевле, их можно разводить до нужной консистенции в зависимости от типа обрабатываемой поверхности. Но для этого нужно иметь на объекте дополнительные емкости, в том числе мерные. Готовые составы удобны в использовании. В отличие от концентратов, важно следить за областью их применения. Жидкости, предназначенные для обработки под обои, не всегда подходят для первичного грунтования стен с высокой впитываемостью.
Время высыхания грунтовки глубокого проникновения и норма расхода на 1 м2 сильно зависят от рецептуры и типа обрабатываемых материалов. Впитываемость всегда нужно оценивать непосредственно на объекте. Поэтому рассмотрим, как сохнут разные типы грунтов при нанесении на бетон.
Тип грунта | Назначение | Время сушки, ч |
Алкидный | По дереву, металлу, бетону | 10-14 |
Акриловый | По бетону, штукатурке, древесине, кирпичу | 2-4 |
Полиуретановый | По всем впитывающим и невпитывающим основаниям | 24 |
Силиконовый | По бетону, кирпичу, штукатурке | 4-5 |
Из представленной в рейтинге продукции, строители предпочитают использовать акриловые грунтовочные средства. Они имеют широкую область применения и быстро сохнут. Средний расход составляет порядка 50-100 грамм на 1 м2.
Все грунтовочные средства обладают схожим принципом действия. Выделим характерные особенности их применения перед проведением разных типов работ.
Оштукатуривание
При нанесении гипсовой штукатурки грунтуют стены из любых материалов. Так избавляются от пыли и укрепляют рыхлые структуры предшествующих покрытий.
Оштукатуривание с применением цементно-песчаных растворов не требует предварительной обработки. Напротив, грунтовочная смесь может полностью забить поры, что исключает попадание в них цементного молочка и снижает прочность. Даже при нанесении штукатурки на пористые газобетон или силикатный кирпич, достаточно просто смочить стены.
Шпаклевание
Перед применением шпаклевки всегда наносят грунтующее средство. Оно выполняет две функции:
- Забивает поры. Все шпаклевки чувствительны к излишнему водопоглощению. При быстром обезвоживании смеси, добиться хорошей прочности не получится.
- Обеспыливает стены. Жидкость для грунтования связывает пыль, которая образовалась во время проведения черновых работ.
Неважно сколько наносится слоев шпаклевки, грунтуют стены только перед первым. Если работать приходится в сырых помещениях, рекомендуют дополнительно использовать препараты из категории «антиплесень», а при контакте с древесиной и антигрибковые средства.
Заливка стяжки
В подавляющем большинстве случаев основанием служит железобетон. Он не нуждается в дополнительной обработке. Единственное, что необходимо сделать — обеспылить пол. Достаточно его тщательно пропылесосить и помыть. Когда нет желания отмывать поверхность, можно ее загрунтовать.
Если под ламинат или линолеум вы используете наливной пол, нужно руководствоваться рекомендациями производителя смеси.
Поклейка обоев
После шлифовки шпаклевки всегда остается много пыли. Самый простой способ избавиться от нее — загрунтовать стены. Обои — легкий материал, не требующий высокой прочности, поэтому можно воспользоваться грунтом эконом-класса.
Покраска
На излишне плотную, глянцевую после грунтования поверхность может не взяться краска. Поэтому всегда нужно исходить из конкретных условий и рекомендаций производителей. Если особых указаний нет, лучше воспользоваться концентратом. При этом добавить в него воды вдвое больше, чем указано в инструкции.
Во время ремонта всегда учитывайте особенности состава грунтовки глубокого проникновения, следуйте рекомендациям производителей и приведенным выше советам. Это позволит выполнить работы качественно и без переделок.
- Материал подготовил: Игорь Степаньков
Как выбрать грунтовку глубокого проникновения? Свойства, особенности, советы
Перед нанесением отделочных материалов на стены и другие поверхности обязательно проводятся подготовительные работы, предусматривающие грунтование. Это позволяет улучшить свойства основания и увеличить срок его службы.
Как выбрать грунтовку глубокого проникновения? Свойства, особенности, советы
Перед нанесением отделочных материалов на стены и другие поверхности обязательно проводятся подготовительные работы, предусматривающие грунтование. Это позволяет улучшить свойства основания и увеличить срок его службы. Глубокопроникающая грунтовка используется для обработки пористых и рыхлых поверхностей, она может обладать антисептическими, влагостойкими и антибактериальными качествами.
Принцип действия и применение грунтовки
После нанесения грунтовки на поверхность жидкость полностью пропитывает ее. При высыхании небольшие шарики акриловых смол склеиваются между собой и формируют длинные нити, пронизывающие основание на значительную глубину.
Грунтовка является связующим звеном между основанием и отделочными материалами, она укрепляет слабые и рыхлые поверхности, благодаря чему их впитывающая способность значительно уменьшается, сглаживает небольшие неровности и улучшает адгезию. Это дает возможность равномерно и экономно нанести отделочный слой.
Существуют различные виды пропитки, подходящие для разных поверхностей.
Применение раствора актуально перед:
-
окраской цементной штукатурки – препятствует осыпанию основания;
-
поклейкой обоев на основание с известью – не позволит побелке осыпаться в результате колебаний температуры или изменении уровня влажности;
-
окрашиванием кирпичных стен.
Посмотреть продукцию
Состав, основные особенности
Грунтовка глубокого проникновения, как правило, содержит в себе следующие вещества:
В зависимости от производителя, в грунтовку могут добавляться и другие вещества:
-
латекс – увеличивает сцепление;
-
силикон – придает поверхности водоотталкивающие качества;
-
фунгициды – добавляют составу антисептические свойства.
Дополнительные элементы определяют назначение грунтовки и необходимое для полного высыхания время. Расход жидкости колеблется в пределах 100–200 г на 1 м2 поверхности и зависит от впитывающей способности основания.
Характеристики, способствующие росту популярности грунтовки:
-
высокая паропроницаемость и влагостойкость;
-
отличные сцепляющие свойства;
-
устойчивость к морозам до -15°C;
-
образование после высыхания прозрачного слоя;
-
повышение устойчивости к механическим повреждениям и воздействию химических веществ.
Кроме того, применение грунтовочного состава позволяет существенно сэкономить отделочные материалы.
Разновидности грунтовки
Различают несколько видов глубокопроникающей грунтовки, которая может классифицироваться по назначению, месту применения или составу. Рассмотрим самые распространенные разновидности.
Универсальная
Эта грунтовка глубокого проникновения может использоваться практически для всех внутренних и внешних работ, ею обрабатывают и вертикальные, и горизонтальные поверхности. Раствор имеет следующие достоинства:
-
хорошо сочетается с разными типами оснований;
-
оказывает на поверхности укрепляющее действие;
-
можно применять на стяжках с подогревом;
-
легко определить, какая часть поверхности уже обработана.
Это экологически безопасное вещество пользуется большой популярностью у потребителей.
Акриловая
Также может использоваться для обработки почти всех оснований, неважно, дерево это, гипсокартон или кирпичная стена. Достоинства этой грунтовки:
-
препятствует размножению микроорганизмов, вредных для здоровья человека;
-
моментально высыхает;
-
уменьшает расход отделочных материалов.
Кроме того, снижается поглощающая способность обрабатываемой поверхности.
Антигрибковая
Появление грибка или плесени в жилых зданиях может значительно ухудшить здоровье проживающих в них людей. Для предотвращения таких проблем и создаются антигрибковые средства. Они могут иметь любую основу – минеральную, акриловую, алкидную, но обязательными компонентами являются фунгициды. Такой грунт обычно используется для обработки уже пораженных вредителями поверхностей.
Антисептическая
Главным отличием этого вида состава является то, что он препятствует развитию плесени или грибка и используется для нанесения на еще не пораженные основания. Наиболее актуальны подобные грунты в туалетах и ванных комнатах. Также они могут применяться для обработки пола.
Пропитка для фасадов
Большинство фасадных поверхностей выполняется из минеральных материалов, к которым относятся силикатные кирпичи, штукатурка, газосиликатные блоки. Такие основания легко взаимодействуют с водой и другими веществами, поэтому грунтовка глубокого проникновения для фасадов должна иметь силиконовую или силикатную основу.
Грунтовки для бетона
Другое наименование таких пропиток – «Бетоноконтакт». Они значительно увеличивают адгезию, делая поверхность более шероховатой, и не подходят для оснований, требующих укрепления.
Латексная грунтовка
Основа данной пропитки состоит из воды и полимера. Она применяется для того, чтобы скрыть небольшие изъяны металлической, деревянной или бетонной поверхности – пятна жира, смолы, ржавчины или копоти. Также подобные составы хорошо подходят для обработки оснований в помещениях с высокой влажностью. Довольно часто латексное средство используют в сочетании с алкидным грунтом.
Правила выбора глубокопроникающей грунтовки
Грунтовка должна отвечать если не всем, то хотя бы большей части ваших запросов. При ее выборе следует обращать внимание на следующие факторы:
-
для каких работ требуется средство – фасадных или внутренних. В первом случае необходимо приобретать пропитки, устойчивые к низким температурам. При работе внутри здания следует отдать предпочтение грунту без сильного запаха. Для обработки помещений с повышенной влажностью лучше всего использовать антисептическую смесь;
-
материал, из которого изготовлено основание. Так, для бетона подойдет акриловая или алкидная пропитка, для дерева – антисептическая масляная, а для кафеля – антигрибковая;
-
период полного высыхания – при проведении внутренних работ очень важно, чтобы высыхание грунта происходило в короткий срок, особенно, если нужно нанести несколько слоев;
-
отделочный материал. Под разные виды отделки можно подобрать специальную пропитку, назначение которой указано на этикетке. Или же воспользоваться универсальным грунтом, который подходит для всех отделочных материалов;
-
объем – чтобы рассчитать нужное количество средства, необходимо знать его расход на м2 и площадь основания, требующего обработки;
-
изготовитель и отзывы потребителей являются не менее важными факторами. Следует остановится на продукции предприятий, хорошо зарекомендовавших себя.
Кроме того, стоит обратить внимание на отметку, соответствует ли товар требованиям ГОСТ или же он произведен по ТУ.
Советы по нанесению
Использовать грунтовку несложно, для этого не требуется особых навыков, необходимо только соблюдать определенные правила:
-
Перед обработкой основание следует очистить от строительного мусора, пыли и жирных пятен. Избавиться от пыли помогут пылесос, щетка или метелка, удалить отслаивающееся старое покрытие можно жестким шпателем.
-
Присутствующие на поверхности металлические элементы рекомендуется освободить от ржавчины.
-
Наносить раствор на пол и стены можно широкой кистью, при этом слой должен быть равномерным. Применять для нанесения валик стоит только при обработке ровных поверхностей.
-
На больших площадях для нанесения состава лучше использовать краскопульт – это значительно ускорит процесс обработки. Также этим способом можно воспользоваться при нанесении средства на потолок.
-
На основание с большим количеством пор состав наносится в 2–3 слоя, а крупные трещины и щели предварительно заделывают.
-
Каждый новый слой не стоит наносить до того, как высохнет предыдущий.
Существуют концентрированные пропитки, в которые для того, чтобы получить необходимую консистенцию, требуется добавлять воду или растворитель. Как правило, делается это в пропорции 1:1 или в том соотношении, которое указал производитель.
Если в качестве отделочного материала используется гипсовая шпаклевка, то глубокопроникающую грунтовку наносят дважды – перед шпатлеванием и после него.
Грунтовка своими руками — как приготовить для повышение прочности
Роль грунтовки в строительно-монтажных работах имеет большое значение. Основная ее особенность – улучшение адгезии материалов. Помимо этого она имеет обширный ряд преимуществ в использовании. В зависимости от требований и сфер применения в магазинах можно найти различные виды грунтовочных составов. Но при желании можно сделать грунтовку своими руками. Состоит она из доступных средств, в основе используется клей и это значительно снижает ее себестоимость.
Виды грунтовок
Грунтующий материал имеет различные виды. Профессионалы чаще выбирают грунт по составу, а новичкам в строительстве проще сделать выбор по назначению.
Также смеси могут различаться в зависимости от добавок, которые могут быть наделены особыми характеристиками.
Классификации грунтовок:
- по составу: акриловые, минеральные, алкидные, глифталевые, фосфатные, кварцевые и др.;
- по степени проникновения: обычного и глубокого проникновения;
- по назначению: для штукатурки, бетона, дерева, металла, универсальные;
- по месту использования: внутри помещения или снаружи, универсальные;
- по свойствам: влагоустойчивые, антисептические, антикоррозийные, противогрибковые и др.
Самостоятельно подобрать подходящий грунтовочный материал проще, ориентируясь по состоянию поверхности и виду отделки. Эти критерии помогут выбрать лучший состав в данном случае.
В некоторых случаях, когда например, необходимо небольшое количество состава или важно сэкономить, можно сделать грунтующий раствор самостоятельно. Как сделать грунтовку рассмотрим далее.
Как сделать грунт для улучшения адгезии
Адгезионная грунтовка чаще всего применяется на гладких поверхностях и образует на них шероховатую пленку. Это наиболее подходящий состав грунта для стен, подготавливаемых под окраску или оклеивание обоями. Для самостоятельного приготовления такого состава, понадобятся такие материалы: брусок хозяйственного мыла, малярный клей – 200 гр., алюмокалиевые квасцы – 250 гр., порошковый мел – 2 кг, олифа – 30 мл. В случае, если нашли мел только обычный, его можно растолочь до пылеобразного состояния. Но главное, чтобы не остались кусочки, они ухудшат качество итоговой работы. Как сделать грунтовку для стен своими руками:
- один литр воды доводится до кипения и в нее добавляются алюминиевые квасцы;
- в отдельной таре на медленном огне подогревается 10% смесь клея. Далее в жидкость добавляют натертое на терке мыло. Помешивая, состав доводят до полного растворения;
- затем добавляют олифу и кварцевый раствор;
- во избежание комочков мел лучше просеять.
Готовить такую смесь следует только в алюминиевой посуде. После остывания состав можно сразу наносить на подготовленную поверхность.
Внимание! Качественно покрыть любые поры сможет только жидкая грунтовка. Поэтому если приготовленный состав получился густым, его просто разбавляют горячей водой.
Как приготовить грунт для повышения прочности
В первую очередь такой состав необходим при ремонте и реставрации ветхих помещений. Также его используют при утеплении. Грунт для повышения прочности способен укрепить основание постройки из кирпича, который начал крошиться. Также укрепляющую смесь можно применять для покрытия бетона и пористых поверхностей.
Чем можно заменить грунтовку для стен? Состав рецепта: столярный клей – 500 мл, медный купорос – 100 гр., хозяйственное мыло – 1 брусок. Медный купорос можно встретить в магазинах для садоводов и огородников. Чтобы не возникла реакция при варке, следует готовить только в эмалированной, не пригодной для пищи посуде. Смесь готовиться по следующей схеме:
- 7 литров воды необходимо довести до кипения;
- после закипания воды, убавляют огонь. Непрерывно помешивая деревянной лопаткой, постепенно засыпают натертое на терке мыло;
- после того как мыло растворится, добавляют столярный клей, и затем купорос;
- данный раствор следует уваривать на маленьком огне в течение получаса, периодически помешивая, во избежание комков. Если все же комочков не удалось избежать, то их разбивают миксером;
- готовый состав процеживается через марлю и оставляется до полного остывания.
Остывшей смесью грунтуют стены из бетона и кирпича. Она не только способствует укреплению, но и препятствует появлению черной плесени и грибка.
Из чего замесить грунт глубокого проникновения
Самая простая и популярная самодельная грунтовка — это грунтовка глубокого проникновения. Основной ее ингредиент – строительный клей ПВА, способный глубоко проникать в поры и трещины. Он создает водостойкую пленку, и связывает мельчайшие части пыли, не нарушая вентиляции. Но главное соблюсти пропорции, иначе пленка от клея будет отслаиваться вместе с отделочным материалом.
Для приготовления необходимы всего три составляющие: клей ПВА – 1 л, вода – 8 л, цемент – 1 мастерок. Вместо цемента можно применить порошкообразный мел.
Рецепт приготовления:
- первоначально в посуду вливают клей, в который добавляют воду и все хорошо перемешивается до растворения;
- затем насыпают цемент и размешивают до однородности;
- завершительный этап – процеживание раствора с использованием марли.
Приготовленный состав лучше протестировать на отдельном участке. После высыхания не должна образоваться пленка. Если же она появилась, то состав разбавляется водой. При покрытии стены грунтом, материал должен лечь равномерно и оставить слабозаметный белый след.
Правильное нанесение грунтовки
Справиться с грунтованием поверхностей сможет любой мастер даже без опыта, необходимо только соблюсти основные правила:
- перед покрытием грунтовкой стены нуждаются в подготовке – удалите старое покрытие, краску, очистите от грязи, пыли;
- для нанесения используется валик или кисть, обмакиваемая в раствор в специальной ванночке;
- смоченной кистью, валиком покрывается вся поверхность. Двигаться следует сверху вниз, не проводя на одном месте дважды;
- после полного высыхания наносят повторный слой.
Внимание! Если приходиться готовить новый раствор, посуду стоит тщательно промыть от старой грунтовки, в ином случае могут образоваться комочки.
Для нанесения самодельного грунтовочного материала не рекомендуют применять распылитель. Его использование увеличивает риск нанесения состава на не подлежащие грунтовке предметы. За счет сильной липкости они будут испорчены. Чем можно оттереть грунтовку — читаем здесь.
Внимание! Все грунтовочные растворы, сделанные в домашних условиях, нужно использовать в течение суток, в ином случае многие из них потеряют свои качества. Перечисленные рецепты помогут не только сэкономить деньги, но и время. Так если под рукой не оказалось нужной грунтовки, вы всегда сможете ее приготовить сами. А с достаточно простым процессом нанесения справиться даже новичок в ремонте.
состав, виды и их характеристики
ПОДЕЛИТЕСЬ
В СОЦСЕТЯХ
Правильная грунтовка для стен под обои дает возможность хозяевам лицезреть прекрасную ровную поверхность после проведения ремонта. Любые отделочные работы начинаются с подготовки необходимой рабочей поверхности. Так и стены под поклейку обоев вначале очищают от старого покрытия, затем шпаклюют и наносят грунт. Только после этого на них можно клеить сами обои. Строительная промышленность производит много различных видов грунтовки.
Перед поклейкой обоев стены необходимо прогрунтовать
Грунтовка для стен под обои: состав, виды и их характеристики
Наклейка обоев, как все отделочные работы, нуждается в использовании вспомогательных материалов. Одним из них является грунтовка для стен под обои. Она представляет собой суспензию различной консистенции, которая после перемешивания превращается в однородную массу молочного оттенка. Нанесенная на поверхность стен, она создает сплошную пленку, которая обладает прекрасной адгезией с большинством отделочных материалов.
Состоит грунтовка, главным образом, из органических смол и клеящих компонентов. Образование пленки происходит за счет полимеров из силикатов, латекса, акрила или силикона. В растворе также присутствуют добавки, придающие большую пластичность или текучесть жидкости.
Компании производители обязаны указывать на упаковке ряд параметров, которые необходимо знать пользователю:
- Порядок приготовления смеси и ее пропорции.
- Средний расход препарата на 1 м².
- Способ, которым материал рекомендуют наносить на грунтуемую поверхность.
- Время, в течение которого произойдет полное высыхание слоя, нанесенного на стену.
- Гарантируемый компанией срок годности и дата производства смеси.
Под светлые обои лучше выбрать прозрачную грунтовку
По общепринятым правилам, грунтовка должна иметь свойства, которые необходимы для ее непосредственного назначения, а именно:
- в поверхность, которая обрабатывается, состав должен проникать очень глубоко;
- адгезия соприкасающихся материалов с применением грунтовки должна становиться гораздо выше;
- поверхностная структура материала при осуществлении грунтовки стен перед поклейкой обоев должна укрепляться;
- любая грунтовка просто обязана иметь антисептическое и антигрибковое действие;
- быстрое высыхание – непременный атрибут любой качественной грунтовки.
Осуществляя выбор того или иного типа праймера (так еще иногда называют грунтовочную смесь), необходимо знать следующее:
- покрываемый материал. Ведь у штукатурки, бетона, гипсокартона и других оснований совершенно разные свойства;
- уровень влажности в том помещении, где планируется применять праймер;
- отличается по своему составу грунтовка для простых обоев и для жидких;
- даже плотность обоев имеет значение при выборе того или иного грунта.
Для работы понадобится малярный валик и пластиковый поддон
Полезный совет! Перед походом в магазин для приобретения грунтовки подготовьте все вышеперечисленные исходные данные. Их необходимо сообщить продавцу, чтобы он подобрал вам самый оптимальный вариант праймера.
Назначение грунтовочных смесей
Нанесение грунтовки для стен под обои обеспечивает наведение порядка на поверхности стен, а также гарантирует создание превосходной подложки под клеевой состав. Раствор глубоко проникает во все имеющиеся поры на стене, скрепляя их и вытесняя оттуда воздух, что предотвратит образование пузырей под обоями. Обеззараживание поверхности происходит посредством того, что в составе грунтовок имеется вещество, которое способно поражать живые микроорганизмы: грибы, плесень и бактерии. Праймер создает прекрасную адгезию между стеной и обоями. Особенно это актуально в различных стыках и углах.
Грунтовочные смеси можно наносить на стены с помощью щетки
Пленка, которая создается при нанесении праймера на стены, не позволяет глубоко впитываться клеевому составу, что создает его дополнительную экономию. Кроме того, она делает цвет стены равномерным, что очень критично при наклейке светлых обоев. Смеси обладают свойством немного сглаживать незначительные изъяны в поверхности стен, что делает приклеивание полотен обоев более удобным. При этом, микроклимат в жилище не нарушается, так как стены не прекращают «дышать» после использования грунтовочных смесей.
Какие существуют основные виды праймеров
В настоящее время принято деление всех грунтовок по трем критериям: растворимость, используемый материал и назначение. Если взять критерий растворимости, то химическая промышленность предлагает следующие виды праймеров:
- Растворяемые органическими растворителями: алкидами, полиуретаном, латексом.
- На водной основе бывают акриловые, силикатные, латексные и силиконовые грунтовки.
- На основе природных минералов, таких, как: гипс, цемент или известь.
Выполнить грунтовку стен самостоятельно не составит никакого труда
По используемому в составе грунта материалу можно выделить несколько типов и указать их свойства и предпочтительную поверхность для обработки:
- алкидный праймер лучше всего подходит для покрытия некоторых металлических и бетонных типов поверхностей, а также деревянных сооружений. Время его высыхания не более 14 часов;
- акриловые грунтовки находят свое применение на деревянных, оштукатуренных или кирпичных стенах. Могут применяться на поверхностях из ДВП и ДСП. Высыхают за 2-3 часа;
- полиуретановые хорошо применять на сильно запыленных или плохо впитывающих поверхностях. Время их высыхания составляет около 24 ч;
- силиконовые праймеры можно обнаружить на бетонных, оштукатуренных или известково-песчаных стенах. Высыхают они не дольше, чем 5 ч;
- латексная грунтовка для стен под обои подходит хоть для какого типа поверхности, высыхает всего за 2 часа;
- силикатные и минеральные типы грунтов с успехом наносят на оштукатуренную, кирпичную или бетонную поверхность. Сохнут оба эти типа не менее 24 ч.
Стены грунтуются после их оштукатуривания и шпаклевания
Полезный совет! Совершенно недопустимо обрабатывать силикатной грунтовкой поверхности, содержащие гипс. Они не предназначены для этих целей и ведут к потере прочностных свойств.
По предназначению все праймеры делят на несколько обособленных видов:
- универсального применения. Они выпускаются на водной основе;
- имеющие специализированное предназначение: антигрибковые, антибактериальные или антикоррозийные;
- препараты с глубоким до 15 мм проникновением в поверхность;
- имеющие изолирующие свойства;
- так называемый бетонконтакт, позволяющий обеспечивать наилучшую адгезию с бетонными поверхностями.
Грунтовку легко наносить на стену с помощью валика
Грунтовка стен перед поклейкой обоев обычно осуществляется универсальными, алкидными, латексными, акриловыми праймерами или обычным обойным клеем.
Как происходит действие различных видов грунтовочных смесей
Рассмотрим способ применения того или иного вида грунта. Акриловые грунтовки наносят на стены при помощи валика. В местах, где это невозможно, применяют кисть. В зависимости от качества грунтуемой поверхности делают два или один слой. На гипсокартон наносят всегда 2 слоя. Преимущества акрилового вида в его универсальности. Он подходит практически для любых стен.
Полезный совет! С обработанных акриловым грунтом стен очень легко снимать старые обои. Их нужно просто смочить нагретой водой.
Клеить обои можно только после того, так прогрунтованные стены просохнут
Латексную группу часто применяют на разрушающихся поверхностях, так как она способна скреплять частицы вещества. Алкидные праймеры создают влагозащитную пленку и уничтожают плесень. Свойство блокировать ржавчину позволяет этот тип грунтовок применять на железобетонных поверхностях.
Универсальные типы применимы для любой поверхности, что делает их наиболее востребованными. Однако не стоит наносить их на разрушающиеся стены. Для этого лучше выбрать более специфический тип грунта. Грунтовка стен перед поклейкой обоев универсальным праймером гарантирует то, что все требования по качеству работ будут выполнены.
Обзор производителей грунтовочных смесей
На рынке отделочных материалов присутствуют как отечественные, так и зарубежные бренды. Одним из них является Церезит. Под этой маркой поставляется несколько видов грунтовочных смесей, которые очень хорошо себя показали. Отечественный производитель «Скиф-Импекс» выпускает всю линейку грунтовочных смесей для различных целей. Еще один известный производитель – фирма «UNIS», которая также славится высоким качеством продукции.
Производители предлагают различные варианты грунтовочных смесей
Неважно, грунтовку какого бренда выбрать, важно, чтобы состав был качественным и непременно доступным для широкого использования. Использование праймеров для грунтовки стен перед поклейкой обоев сегодня видится обязательным элементом ремонта.
Грунтовка стен перед поклейкой обоев (видео)
ОЦЕНИТЕМАТЕРИАЛ Загрузка… ПОДЕЛИТЕСЬ
В СОЦСЕТЯХ
СМОТРИТЕ ТАКЖЕ
REMOO В ВАШЕЙ ПОЧТЕᐉ Состав грунтовок для стен, пола, потолка
- Подробности
- Опубликовано 24 Апрель 2019
- Просмотров: 364
Состав грунтовки (из чего состоит грунтовка)?
Уникальность грунтового состава в его способности основательного проникновения и выравнивания основания до однородной поверхности. Выступает в роли пропитки исходных ненадежных, абсорбирующих и ячеистых опор любой многосложности. Это может быть кирпичная стена, бетонное основание, гипсовая перегородка или ранняя штукатурка. Использование данного состава на начальных этапах существенно укрепляет основание, и корректирует баланс влажности. Грунтовка обладает отличной адгезией ко всем минеральным основаниям, глубоко проникает во все трещины и неровности, образуя ровную поверхность.
Грунтовка это специальный состав, предназначенный для первичной обработки поверхности стен, пола, потолка. Подходит под любой исходный материал, будь то бетон или штукатурка. Основной функцией применения является улучшение сцепления с наносимым покрытием, к сопутствующим же можно отнести:
- Защиту от коррозии;
- Выравнивание поверхности;
- Укрепление основания.
Грунтовка состав для малярных работ, содержащий пигмент и связывающее звено.
- Идеальна для заделки повреждений, неровностей, трещин;
- Применяется для поверхностей перед их последующей отделкой;
- Для надежного сцепления обрабатываемой поверхности с другими видами отделочных материалов.
Состав грунтовки является определяющим фактором при выделении определенных видов грунта. На сегодняшний момент на рынке строительных материалов представлены десятки различных видов грунтовки, рассмотрим наиболее важные показатели этого состава.
Грунтовка по своему составу подразделяется на водные (на основе клея и минерального составляющего), масляные и синтетические. Все они, как правило, носят название, аналогичное названию используемого в них связующего.
- Делая выбор необходимо учесть несколько факторов:
- Исходную выравниваемую поверхность;
- Микроклимат помещения в котором будет применяться материал.
- Во избежание дальнейших разочарований следует внимательно отнестись к информации размещенной на упаковки состава. Правильно выбранная грунтовка позволит исключительно верно подготовить основу для дальнейших работ;
- Не экономьте на материала, от ее качества зависит вся последующая работа и конечный результат;
- Обращайте внимание на состав грунтовки (из чего состоит грунтовка) и у вас не возникнет никаких проблем.
Предлагаем ознакомиться с ассортиментом и ценами на нашем сайте строительных материалов ХСМ и купить грунтовку в Харькове.
- < Назад
- Вперёд >
Primer RNA — обзор
Синтез отстающей цепи
Синтез отстающей цепи в репликационной вилке начинается с праймера РНК, который создается примазой. Однако, поскольку отстающая цепь состоит из коротких фрагментов Окадзаки, несколько праймеров РНК необходимы в повторяющемся цикле инициации праймера, удлинения с помощью ДНК-полимеразы и лигирования для запечатывания фрагментов (, рис. 2, ). Фрагменты Окадзаки имеют длину 1000–3000 оснований, а репликация происходит при 400–1000 оснований с –1 , поэтому цикл реакций на отстающей цепи должен завершиться за несколько секунд.Реакции, необходимые для праймирования следующего фрагмента, удлинения настоящего фрагмента и удаления праймеров из предыдущих фрагментов, могут происходить одновременно, что позволяет быстро завершить цикл отстающей цепи.
Начиная с стадии элонгации этого цикла, холофермент полимеразы с отстающей цепью синтезирует фрагмент Окадзаки, который начинается с праймера, обозначенного P2 ( Рисунок 2 (а) ). В то же время геликаза, окружающая матрицу отстающей цепи на вилке, раскручивает дуплекс перед холоферментом полимеразы ведущей цепи.ОцДНК, генерируемая геликазой, вместе с оцДНК, остающейся для репликации перед холоферментом полимеразы с отстающей нитью, покрыта белками SSB.
Поскольку петля отстающей цепи продолжает расти из-за активности геликазы и голофермента полимеразы отстающей цепи, 5’– 3′-нуклеаза удаляет праймер РНК (P1) и небольшое количество соседней ДНК из предыдущего фрагмента. ( Рисунок 2 (б) ). Удаление этой ДНК, впервые добавленной к праймеру, может повысить точность репликации.
Когда холофермент полимеразы с отстающей цепью завершает формирование растущего фрагмента, создавая разрыв, зажим высвобождает полимеразу и остается на ДНК ( Рисунок 2 (c) ). В E. coli это высвобождение ядра полимеразы из β-зажима облегчается за счет С-концевого домена τ-субъединицы загрузчика зажима, действующего как разгрузчик. Нет никаких доказательств того, что загрузчик зажима необходим для разъединения зажима и полимеразы в системе T4. Если полимераза не может высвободиться в разрезе, она может продолжать синтез ДНК, смещая 5′-конец нижележащего фрагмента, образуя лоскут.Однако все прокариотические 5′-нуклеазы, участвующие в удалении праймера, также обладают эндонуклеазной активностью лоскута, способной удалять эти смещенные цепи. Разрывы, которые образуются между соседними фрагментами, закрываются ДНК-лигазой.
Когда синтез формирующегося фрагмента завершен, праймаза, связанная с геликазой на вилке, создает праймер РНК (P3), который будет использоваться для запуска следующего фрагмента ( Рисунок 2 (c) ). Новый зажим устанавливается на праймер в E.coli и T4 с помощью загрузчика зажима. Загрузчик зажима E. coli связывается с двумя полимеразами, а также с геликазой на вилке, в то время как зажим набирается из раствора. Эксперименты с разбавлением предполагают, что и зажим T4, и загрузчик зажима должны быть предоставлены из раствора для каждого цикла синтеза отстающей цепи. Иногда примаза создает праймер до того, как холофермент полимеразы с отстающей цепью завершает предыдущий фрагмент Окадзаки. Это действует как сигнал, который вызывает преждевременное высвобождение полимеразы отстающей цепи, оставляя промежуток между фрагментами, который в конечном итоге должен быть восстановлен путем загрузки другой полимеразы.
Наконец, полимераза отстающей цепи переносится на загруженный зажимом новый праймер (P3), чтобы начать синтез следующего фрагмента ( Рисунок 2 (d) ). В случае Т7 ДНК-связывающий домен праймы связывает новый праймер и передает его непосредственно полимеразе отстающей цепи. Одна и та же полимераза с отстающей цепью рециклируется из одного фрагмента Окадзаки в следующий, удерживаясь на вилке репликации за счет взаимодействий с загрузчиком зажима в E.coli , полимеразой ведущей цепи в Т4 или геликазой в Т7.
ДНК-полимераз требует матрицы и праймера — Биохимия
ДНК-полимеразы катализируют образование полинуклеотидных цепей путем добавления последовательных нуклеотидов, полученных из дезоксинуклеозидтрифосфатов. Полимеразная реакция происходит только в присутствии подходящей ДНК-матрицы. Каждый поступающий нуклеозидтрифосфат сначала образует соответствующую пару оснований с основанием в этом шаблоне. Только тогда ДНК-полимераза связывает поступающее основание с предшественником в цепи.Таким образом, ДНК-полимеразы являются матричными ферментами.
ДНК-полимеразы добавляют нуклеотиды к 3′-концу полинуклеотидной цепи. Полимераза катализирует нуклеофильную атаку конца 3′-гидроксильной группы полинуклеотидной цепи на α-фосфатную группу добавляемого нуклеозидтрифосфата (см.). Чтобы инициировать эту реакцию, ДНК-полимеразам требуется праймер со свободной 3′-гидроксильной группой, уже спаренной по основанию с матрицей. Они не могут начать с нуля, добавляя нуклеотиды к свободной одноцепочечной матрице ДНК.РНК-полимераза, напротив, может инициировать синтез РНК без праймера (раздел 28.1.4).
27.2.1. Все ДНК-полимеразы имеют общие структурные особенности
Трехмерные структуры ряда ферментов ДНК-полимеразы известны. Первой такой структурой, которую необходимо было определить, была структура так называемого фрагмента Кленова ДНК-полимеразы I из E. coli (). Этот фрагмент состоит из двух основных частей полного фермента, включая полимеразную единицу. Этот блок приближается к форме правой руки с областями, которые называются пальцами, большим пальцем и ладонью.Помимо полимеразы, фрагмент Кленова включает домен с 3 ‘→ 5’ активностью экзонуклеазы , который участвует в проверке и коррекции полинуклеотидного продукта (раздел 27.2.4).
Рисунок 27.11
Структура ДНК-полимеразы. Первой определенной структурой ДНК-полимеразы был фрагмент ДНК-полимеразы I E.coli , названный фрагментом Кленова. Как и другие ДНК-полимеразы, полимеразный блок напоминает правую руку с пальцами (синий), ладонь (желтый), (подробнее…)
ДНК-полимеразы удивительно похожи по общей форме, хотя существенно различаются в деталях. Выявлено не менее пяти структурных классов; некоторые из них явно гомологичны, тогда как другие, вероятно, являются продуктами конвергентной эволюции. Во всех случаях домены пальца и большого пальца охватывают ДНК и удерживают ее на активном сайте фермента, который состоит в основном из остатков домена ладони. Кроме того, все полимеразы катализируют одну и ту же полимеразную реакцию, которая зависит от ионов двух металлов.
27.2.2. Два связанных иона металла участвуют в полимеразной реакции
Как и все ферменты с нуклеозидтрифосфатными субстратами, ДНК-полимеразы требуют для активности ионов металлов. Исследование структур ДНК-полимераз со связанными субстратами и аналогами субстратов обнаруживает присутствие двух ионов металлов в активном центре. Один ион металла связывает как дезоксинуклеозидтрифосфат (dNTP), так и 3′-гидроксильную группу праймера, тогда как другой взаимодействует только с 3′-гидроксильной группой ().Два иона металла соединены карбоксилатными группами двух остатков аспартата в пальмовом домене полимеразы. Эти боковые цепи удерживают ионы металлов в правильном положении и ориентации. Ион металла, связанный с праймером, активирует 3′-гидроксильную группу праймера, облегчая его атаку на α-фосфатную группу субстрата dNTP в активном центре. Два иона металла вместе помогают стабилизировать отрицательный заряд, который накапливается в пентакоординированном переходном состоянии. Ион металла, первоначально связанный с dNTP, стабилизирует отрицательный заряд пирофосфатного продукта.
Рисунок 27.12
Механизм ДНК-полимеразы. В ДНК-полимеразной реакции участвуют два иона металла (обычно Mg 2+ ). Один ион металла координирует 3′-гидроксильную группу праймера, тогда как фосфатная группа нуклеозидтрифосфатного мостика соединяет (подробнее …)
27.2.3. Специфичность репликации продиктована водородной связью, и комплементарность формы между основаниями
ДНК должна реплицироваться с высокой точностью. Каждое основание, добавляемое к растущей цепи, с высокой вероятностью должно быть дополнением Уотсона-Крика к основанию в соответствующем положении в цепочке-шаблоне.Связыванию NTP, содержащего подходящее основание, способствует образование пары оснований, которая стабилизируется специфическими водородными связями. Связывание некомплементарного основания маловероятно, поскольку взаимодействия неблагоприятны. Водородные связи, связывающие два комплементарных основания, вносят значительный вклад в точность репликации ДНК. Однако ДНК-полимеразы точнее реплицируют ДНК, чем можно объяснить только этими взаимодействиями.
Исследование кристаллических структур различных ДНК-полимераз выявило несколько дополнительных механизмов, с помощью которых повышается точность репликации.Во-первых, остатки фермента образуют водородные связи со стороной малой бороздки пары оснований в активном центре (). В малой бороздке акцепторы водородной связи присутствуют в одних и тех же положениях для всех пар оснований Watson-Crick. Эти взаимодействия действуют как «линейка», которая измеряет, сформировалась ли правильно разнесенная пара оснований в активном сайте. Во-вторых, ДНК-полимеразы закрываются вокруг входящего NTP (). Связывание нуклеозидтрифосфата с активным сайтом ДНК-полимеразы запускает конформационное изменение: домен пальца вращается, образуя плотный карман, в который легко поместится только пара оснований правильной формы.Мутация консервативного остатка тирозина в верхней части кармана приводит к полимеразе, которая примерно в 40 раз более подвержена ошибкам, чем исходная полимераза.
Рисунок 27.13
Взаимодействия малых канавок. ДНК-полимеразы отдают две водородные связи парам оснований в малой бороздке. Акцепторы водородной связи присутствуют в этих двух положениях для всех пар оснований Watson-Crick, включая показанную пару оснований A-T.
Рисунок 27.14
Избирательность формы. Связывание нуклеозидтрифосфата (NTP) с ДНК-полимеразой вызывает конформационные изменения, создавая плотный карман для пары оснований, состоящей из NTP и его партнера на матричной цепи.Такое конформационное изменение (подробнее …)
27.2.4. Многие полимеразы корректируют недавно добавленные базисы и акцизные ошибки
Многие полимеразы дополнительно повышают точность воспроизведения за счет использования механизмов корректуры. Как уже отмечалось, фрагмент Кленова ДНК-полимеразы I E. coli включает экзонуклеазный домен, который не участвует в самой реакции полимеризации. Вместо этого этот домен удаляет несовпадающие нуклеотиды с 3′-конца ДНК путем гидролиза.Активный сайт экзонуклеазы находится на расстоянии 35 Å от активного сайта полимеразы, но он может быть достигнут недавно синтезированной полинуклеотидной цепью при соответствующих условиях. Механизм проверки основан на повышенной вероятности того, что конец растущей цепи с неправильно включенным нуклеотидом покинет сайт полимеразы и временно переместится на сайт экзонуклеазы ().
Рисунок 27.15
Вычитка. Растущая полинуклеотидная цепь иногда покидает сайт полимеразы ДНК-полимеразы I и мигрирует в сайт экзонуклеазы.Там последний добавленный нуклеотид удаляют гидролизом. Поскольку несовпадающие основания с большей вероятностью уйдут (подробнее …)
Как фермент определяет правильность вновь добавленного основания? Во-первых, неправильная основа не будет правильно сочетаться с прядью шаблона. Его более сильные структурные колебания, допускаемые более слабыми водородными связями, часто будут приводить вновь синтезированную цепь к сайту экзонуклеазы. Во-вторых, после добавления нового нуклеотида ДНК перемещается на одну пару оснований в фермент.Вновь образованная пара оснований должна иметь надлежащие размеры, чтобы соответствовать узлу плотного связывания и участвовать во взаимодействиях водородных связей в малой бороздке, аналогичных таковым в самом сайте полимеризации (см.). Действительно, дуплексная ДНК внутри фермента принимает структуру А-формы, обеспечивая свободный доступ к малой бороздке. Если введено неправильное основание, фермент останавливается, и пауза дает дополнительное время для миграции цепи к сайту экзонуклеазы. Однако за эту функцию редактирования приходится платить: ДНК-полимераза I удаляет приблизительно 1 правильный нуклеотид из 20 путем гидролиза.Хотя удаление правильных нуклеотидов является немного расточительным с точки зрения энергии, корректура увеличивает точность репликации примерно в 1000 раз.
27.2.5. Разделение цепей ДНК требует определенных геликаз и гидролиза АТФ
Для репликации двухцепочечной молекулы ДНК две цепи двойной спирали должны быть отделены друг от друга, по крайней мере, локально. Это разделение позволяет каждой цепи действовать как матрица, на которой может быть собрана новая полинуклеотидная цепь.Для длинных двухцепочечных молекул ДНК скорость спонтанного разделения цепей пренебрежимо мала в физиологических условиях. Специфические ферменты, названные геликазами , используют энергию гидролиза АТФ для разделения цепей.
Детальные механизмы геликазы все еще активно исследуются. Однако определение трехмерных структур нескольких геликаз было источником понимания. Например, бактериальная геликаза, называемая PcrA , включает четыре домена, в дальнейшем называемых доменами A1, A2, B1 и B2 ().Домен A1 содержит складку NTPазы P-петли, как и ожидалось из анализа аминокислотной последовательности. Этот домен участвует в связывании и гидролизе АТФ. Домен B1 гомологичен домену A1, но не имеет P-петли. Домены A2 и B2 имеют уникальную структуру.
Рисунок 27.16
Структура геликазы. Бактериальная геликаза PcrA включает четыре домена: A1, A2, B1 и B2. Домен A1 включает складку NTPазы P-петли, тогда как домен B1 имеет аналогичную общую структуру, но не имеет P-петли и не связывает нуклеотиды.Одноцепочечная (подробнее …)
На основе анализа набора кристаллических структур геликазы, связанных с аналогами нуклеотидов и соответствующими двух- и одноцепочечными молекулами ДНК, был предложен механизм действия этих ферментов (). Домены A1 и B1 способны связывать одноцепочечную ДНК. В отсутствие связанного АТФ оба домена связаны с ДНК. Связывание АТФ запускает конформационные изменения в P-петле и прилегающих областях, которые приводят к закрытию щели между этими двумя доменами.Чтобы добиться этого движения, домен A1 высвобождает ДНК и скользит по цепи ДНК, приближаясь к домену B1. Затем фермент катализирует гидролиз АТФ с образованием АДФ и ортофосфата. При выпуске продукта трещина между доменами A и B открывается. Однако в этом состоянии домен A1 сильнее захватывает ДНК, чем домен B1, поэтому ДНК тянется через домен B1 к домену A1. В результате фермент перемещается по цепи ДНК аналогично тому, как движется дюймовый червь.Что касается PcrA, фермент перемещается в направлении 3 ‘→ 5’. Когда геликаза сталкивается с областью двухцепочечной ДНК, она продолжает двигаться вдоль одной цепи и смещает противоположную цепь ДНК по мере продвижения. Взаимодействие со специфическими карманами на геликазе помогает дестабилизировать дуплекс ДНК, чему способствуют конформационные изменения, вызванные АТФ.
Рисунок 27.17
Геликазный механизм. Первоначально оба домена A1 и B1 PcrA связывают одноцепочечную ДНК. При связывании АТФ щель между этими доменами закрывается, и домен A1 скользит по ДНК.При гидролизе АТФ щель открывается, вытягивая ДНК из домена B1 (подробнее …)
Геликазы составляют большой и разнообразный класс ферментов. Некоторые из этих ферментов движутся в направлении 5 ‘→ 3’, тогда как другие раскручивают РНК, а не ДНК, и участвуют в таких процессах, как сплайсинг РНК и инициация трансляции мРНК. Сравнение аминокислотных последовательностей сотен этих ферментов показывает семь областей поразительной консервации (). Картирование этих областей на структуру PcrA показывает, что они выстилают АТФ-связывающий сайт и щель между двумя доменами, что согласуется с представлением о том, что другие геликазы претерпевают конформационные изменения, аналогичные тем, которые обнаруживаются в PcrA.Однако, в то время как PcrA, по-видимому, действует как мономер, другие члены класса геликаз действуют как олигомеры. Гексамерные структуры одной важной группы аналогичны структуре компонента F -1 АТФ-синтазы (Раздел 18.4.1), что указывает на потенциальное механистическое сходство.
Рисунок 27.18
Консервированные остатки среди Helicases. Сравнение аминокислотных последовательностей сотен геликаз выявило семь участков с сильной консервацией последовательностей (показаны цветом).При картировании в структуре PcrA эти консервативные области лежат вдоль (подробнее …)
ДНК-полимераз, требующих матрицы и праймера — биохимия
ДНК-полимеразы катализируют образование полинуклеотидных цепей путем добавления последовательных нуклеотидов, полученных из дезоксинуклеозидтрифосфаты. Полимеразная реакция происходит только в присутствии подходящей ДНК-матрицы. Каждый поступающий нуклеозидтрифосфат сначала образует соответствующую пару оснований с основанием в этом шаблоне.Только тогда ДНК-полимераза связывает поступающее основание с предшественником в цепи. Таким образом, ДНК-полимеразы являются матричными ферментами.
ДНК-полимеразы добавляют нуклеотиды к 3′-концу полинуклеотидной цепи. Полимераза катализирует нуклеофильную атаку конца 3′-гидроксильной группы полинуклеотидной цепи на α-фосфатную группу добавляемого нуклеозидтрифосфата (см.). Чтобы инициировать эту реакцию, ДНК-полимеразам требуется праймер со свободной 3′-гидроксильной группой, уже спаренной по основанию с матрицей.Они не могут начать с нуля, добавляя нуклеотиды к свободной одноцепочечной матрице ДНК. РНК-полимераза, напротив, может инициировать синтез РНК без праймера (раздел 28.1.4).
27.2.1. Все ДНК-полимеразы имеют общие структурные особенности
Трехмерные структуры ряда ферментов ДНК-полимеразы известны. Первой такой структурой, которую необходимо было определить, была структура так называемого фрагмента Кленова ДНК-полимеразы I из E. coli (). Этот фрагмент состоит из двух основных частей полного фермента, включая полимеразную единицу.Этот блок приближается к форме правой руки с областями, которые называются пальцами, большим пальцем и ладонью. Помимо полимеразы, фрагмент Кленова включает домен с 3 ‘→ 5’ активностью экзонуклеазы , который участвует в проверке и коррекции полинуклеотидного продукта (раздел 27.2.4).
Рисунок 27.11
Структура ДНК-полимеразы. Первой определенной структурой ДНК-полимеразы был фрагмент ДНК-полимеразы I E.coli , названный фрагментом Кленова.Как и другие ДНК-полимеразы, полимеразный блок напоминает правую руку с пальцами (синий), ладонь (желтый), (подробнее …)
ДНК-полимеразыудивительно похожи по общей форме, хотя они существенно различаются в деталях. Выявлено не менее пяти структурных классов; некоторые из них явно гомологичны, тогда как другие, вероятно, являются продуктами конвергентной эволюции. Во всех случаях домены пальца и большого пальца охватывают ДНК и удерживают ее на активном сайте фермента, который состоит в основном из остатков домена ладони.Кроме того, все полимеразы катализируют одну и ту же полимеразную реакцию, которая зависит от ионов двух металлов.
27.2.2. Два связанных иона металла участвуют в полимеразной реакции
Как и все ферменты с нуклеозидтрифосфатными субстратами, ДНК-полимеразы требуют для активности ионов металлов. Исследование структур ДНК-полимераз со связанными субстратами и аналогами субстратов обнаруживает присутствие двух ионов металлов в активном центре. Один ион металла связывает как дезоксинуклеозидтрифосфат (dNTP), так и 3′-гидроксильную группу праймера, тогда как другой взаимодействует только с 3′-гидроксильной группой ().Два иона металла соединены карбоксилатными группами двух остатков аспартата в пальмовом домене полимеразы. Эти боковые цепи удерживают ионы металлов в правильном положении и ориентации. Ион металла, связанный с праймером, активирует 3′-гидроксильную группу праймера, облегчая его атаку на α-фосфатную группу субстрата dNTP в активном центре. Два иона металла вместе помогают стабилизировать отрицательный заряд, который накапливается в пентакоординированном переходном состоянии. Ион металла, первоначально связанный с dNTP, стабилизирует отрицательный заряд пирофосфатного продукта.
Рисунок 27.12
Механизм ДНК-полимеразы. В ДНК-полимеразной реакции участвуют два иона металла (обычно Mg 2+ ). Один ион металла координирует 3′-гидроксильную группу праймера, тогда как фосфатная группа нуклеозидтрифосфатного мостика соединяет (подробнее …)
27.2.3. Специфичность репликации продиктована водородной связью, и комплементарность формы между основаниями
ДНК должна реплицироваться с высокой точностью. Каждое основание, добавляемое к растущей цепи, с высокой вероятностью должно быть дополнением Уотсона-Крика к основанию в соответствующем положении в цепочке-шаблоне.Связыванию NTP, содержащего подходящее основание, способствует образование пары оснований, которая стабилизируется специфическими водородными связями. Связывание некомплементарного основания маловероятно, поскольку взаимодействия неблагоприятны. Водородные связи, связывающие два комплементарных основания, вносят значительный вклад в точность репликации ДНК. Однако ДНК-полимеразы точнее реплицируют ДНК, чем можно объяснить только этими взаимодействиями.
Исследование кристаллических структур различных ДНК-полимераз выявило несколько дополнительных механизмов, с помощью которых повышается точность репликации.Во-первых, остатки фермента образуют водородные связи со стороной малой бороздки пары оснований в активном центре (). В малой бороздке акцепторы водородной связи присутствуют в одних и тех же положениях для всех пар оснований Watson-Crick. Эти взаимодействия действуют как «линейка», которая измеряет, сформировалась ли правильно разнесенная пара оснований в активном сайте. Во-вторых, ДНК-полимеразы закрываются вокруг входящего NTP (). Связывание нуклеозидтрифосфата с активным сайтом ДНК-полимеразы запускает конформационное изменение: домен пальца вращается, образуя плотный карман, в который легко поместится только пара оснований правильной формы.Мутация консервативного остатка тирозина в верхней части кармана приводит к полимеразе, которая примерно в 40 раз более подвержена ошибкам, чем исходная полимераза.
Рисунок 27.13
Взаимодействия малых канавок. ДНК-полимеразы отдают две водородные связи парам оснований в малой бороздке. Акцепторы водородной связи присутствуют в этих двух положениях для всех пар оснований Watson-Crick, включая показанную пару оснований A-T.
Рисунок 27.14
Избирательность формы. Связывание нуклеозидтрифосфата (NTP) с ДНК-полимеразой вызывает конформационные изменения, создавая плотный карман для пары оснований, состоящей из NTP и его партнера на матричной цепи.Такое конформационное изменение (подробнее …)
27.2.4. Многие полимеразы корректируют недавно добавленные базисы и акцизные ошибки
Многие полимеразы дополнительно повышают точность воспроизведения за счет использования механизмов корректуры. Как уже отмечалось, фрагмент Кленова ДНК-полимеразы I E. coli включает экзонуклеазный домен, который не участвует в самой реакции полимеризации. Вместо этого этот домен удаляет несовпадающие нуклеотиды с 3′-конца ДНК путем гидролиза.Активный сайт экзонуклеазы находится на расстоянии 35 Å от активного сайта полимеразы, но он может быть достигнут недавно синтезированной полинуклеотидной цепью при соответствующих условиях. Механизм проверки основан на повышенной вероятности того, что конец растущей цепи с неправильно включенным нуклеотидом покинет сайт полимеразы и временно переместится на сайт экзонуклеазы ().
Рисунок 27.15
Вычитка. Растущая полинуклеотидная цепь иногда покидает сайт полимеразы ДНК-полимеразы I и мигрирует в сайт экзонуклеазы.Там последний добавленный нуклеотид удаляют гидролизом. Поскольку несовпадающие основания с большей вероятностью уйдут (подробнее …)
Как фермент определяет правильность вновь добавленного основания? Во-первых, неправильная основа не будет правильно сочетаться с прядью шаблона. Его более сильные структурные колебания, допускаемые более слабыми водородными связями, часто будут приводить вновь синтезированную цепь к сайту экзонуклеазы. Во-вторых, после добавления нового нуклеотида ДНК перемещается на одну пару оснований в фермент.Вновь образованная пара оснований должна иметь надлежащие размеры, чтобы соответствовать узлу плотного связывания и участвовать во взаимодействиях водородных связей в малой бороздке, аналогичных таковым в самом сайте полимеризации (см.). Действительно, дуплексная ДНК внутри фермента принимает структуру А-формы, обеспечивая свободный доступ к малой бороздке. Если введено неправильное основание, фермент останавливается, и пауза дает дополнительное время для миграции цепи к сайту экзонуклеазы. Однако за эту функцию редактирования приходится платить: ДНК-полимераза I удаляет приблизительно 1 правильный нуклеотид из 20 путем гидролиза.Хотя удаление правильных нуклеотидов является немного расточительным с точки зрения энергии, корректура увеличивает точность репликации примерно в 1000 раз.
27.2.5. Разделение цепей ДНК требует определенных геликаз и гидролиза АТФ
Для репликации двухцепочечной молекулы ДНК две цепи двойной спирали должны быть отделены друг от друга, по крайней мере, локально. Это разделение позволяет каждой цепи действовать как матрица, на которой может быть собрана новая полинуклеотидная цепь.Для длинных двухцепочечных молекул ДНК скорость спонтанного разделения цепей пренебрежимо мала в физиологических условиях. Специфические ферменты, названные геликазами , используют энергию гидролиза АТФ для разделения цепей.
Детальные механизмы геликазы все еще активно исследуются. Однако определение трехмерных структур нескольких геликаз было источником понимания. Например, бактериальная геликаза, называемая PcrA , включает четыре домена, в дальнейшем называемых доменами A1, A2, B1 и B2 ().Домен A1 содержит складку NTPазы P-петли, как и ожидалось из анализа аминокислотной последовательности. Этот домен участвует в связывании и гидролизе АТФ. Домен B1 гомологичен домену A1, но не имеет P-петли. Домены A2 и B2 имеют уникальную структуру.
Рисунок 27.16
Структура геликазы. Бактериальная геликаза PcrA включает четыре домена: A1, A2, B1 и B2. Домен A1 включает складку NTPазы P-петли, тогда как домен B1 имеет аналогичную общую структуру, но не имеет P-петли и не связывает нуклеотиды.Одноцепочечная (подробнее …)
На основе анализа набора кристаллических структур геликазы, связанных с аналогами нуклеотидов и соответствующими двух- и одноцепочечными молекулами ДНК, был предложен механизм действия этих ферментов (). Домены A1 и B1 способны связывать одноцепочечную ДНК. В отсутствие связанного АТФ оба домена связаны с ДНК. Связывание АТФ запускает конформационные изменения в P-петле и прилегающих областях, которые приводят к закрытию щели между этими двумя доменами.Чтобы добиться этого движения, домен A1 высвобождает ДНК и скользит по цепи ДНК, приближаясь к домену B1. Затем фермент катализирует гидролиз АТФ с образованием АДФ и ортофосфата. При выпуске продукта трещина между доменами A и B открывается. Однако в этом состоянии домен A1 сильнее захватывает ДНК, чем домен B1, поэтому ДНК тянется через домен B1 к домену A1. В результате фермент перемещается по цепи ДНК аналогично тому, как движется дюймовый червь.Что касается PcrA, фермент перемещается в направлении 3 ‘→ 5’. Когда геликаза сталкивается с областью двухцепочечной ДНК, она продолжает двигаться вдоль одной цепи и смещает противоположную цепь ДНК по мере продвижения. Взаимодействие со специфическими карманами на геликазе помогает дестабилизировать дуплекс ДНК, чему способствуют конформационные изменения, вызванные АТФ.
Рисунок 27.17
Геликазный механизм. Первоначально оба домена A1 и B1 PcrA связывают одноцепочечную ДНК. При связывании АТФ щель между этими доменами закрывается, и домен A1 скользит по ДНК.При гидролизе АТФ щель открывается, вытягивая ДНК из домена B1 (подробнее …)
Геликазы составляют большой и разнообразный класс ферментов. Некоторые из этих ферментов движутся в направлении 5 ‘→ 3’, тогда как другие раскручивают РНК, а не ДНК, и участвуют в таких процессах, как сплайсинг РНК и инициация трансляции мРНК. Сравнение аминокислотных последовательностей сотен этих ферментов показывает семь областей поразительной консервации (). Картирование этих областей на структуру PcrA показывает, что они выстилают АТФ-связывающий сайт и щель между двумя доменами, что согласуется с представлением о том, что другие геликазы претерпевают конформационные изменения, аналогичные тем, которые обнаруживаются в PcrA.Однако, в то время как PcrA, по-видимому, действует как мономер, другие члены класса геликаз действуют как олигомеры. Гексамерные структуры одной важной группы аналогичны структуре компонента F -1 АТФ-синтазы (Раздел 18.4.1), что указывает на потенциальное механистическое сходство.
Рисунок 27.18
Консервированные остатки среди Helicases. Сравнение аминокислотных последовательностей сотен геликаз выявило семь участков с сильной консервацией последовательностей (показаны цветом).При картировании в структуре PcrA эти консервативные области лежат вдоль (подробнее …)
ДНК-полимераз, требующих матрицы и праймера — биохимия
ДНК-полимеразы катализируют образование полинуклеотидных цепей путем добавления последовательных нуклеотидов, полученных из дезоксинуклеозидтрифосфаты. Полимеразная реакция происходит только в присутствии подходящей ДНК-матрицы. Каждый поступающий нуклеозидтрифосфат сначала образует соответствующую пару оснований с основанием в этом шаблоне.Только тогда ДНК-полимераза связывает поступающее основание с предшественником в цепи. Таким образом, ДНК-полимеразы являются матричными ферментами.
ДНК-полимеразы добавляют нуклеотиды к 3′-концу полинуклеотидной цепи. Полимераза катализирует нуклеофильную атаку конца 3′-гидроксильной группы полинуклеотидной цепи на α-фосфатную группу добавляемого нуклеозидтрифосфата (см.). Чтобы инициировать эту реакцию, ДНК-полимеразам требуется праймер со свободной 3′-гидроксильной группой, уже спаренной по основанию с матрицей.Они не могут начать с нуля, добавляя нуклеотиды к свободной одноцепочечной матрице ДНК. РНК-полимераза, напротив, может инициировать синтез РНК без праймера (раздел 28.1.4).
27.2.1. Все ДНК-полимеразы имеют общие структурные особенности
Трехмерные структуры ряда ферментов ДНК-полимеразы известны. Первой такой структурой, которую необходимо было определить, была структура так называемого фрагмента Кленова ДНК-полимеразы I из E. coli (). Этот фрагмент состоит из двух основных частей полного фермента, включая полимеразную единицу.Этот блок приближается к форме правой руки с областями, которые называются пальцами, большим пальцем и ладонью. Помимо полимеразы, фрагмент Кленова включает домен с 3 ‘→ 5’ активностью экзонуклеазы , который участвует в проверке и коррекции полинуклеотидного продукта (раздел 27.2.4).
Рисунок 27.11
Структура ДНК-полимеразы. Первой определенной структурой ДНК-полимеразы был фрагмент ДНК-полимеразы I E.coli , названный фрагментом Кленова.Как и другие ДНК-полимеразы, полимеразный блок напоминает правую руку с пальцами (синий), ладонь (желтый), (подробнее …)
ДНК-полимеразыудивительно похожи по общей форме, хотя они существенно различаются в деталях. Выявлено не менее пяти структурных классов; некоторые из них явно гомологичны, тогда как другие, вероятно, являются продуктами конвергентной эволюции. Во всех случаях домены пальца и большого пальца охватывают ДНК и удерживают ее на активном сайте фермента, который состоит в основном из остатков домена ладони.Кроме того, все полимеразы катализируют одну и ту же полимеразную реакцию, которая зависит от ионов двух металлов.
27.2.2. Два связанных иона металла участвуют в полимеразной реакции
Как и все ферменты с нуклеозидтрифосфатными субстратами, ДНК-полимеразы требуют для активности ионов металлов. Исследование структур ДНК-полимераз со связанными субстратами и аналогами субстратов обнаруживает присутствие двух ионов металлов в активном центре. Один ион металла связывает как дезоксинуклеозидтрифосфат (dNTP), так и 3′-гидроксильную группу праймера, тогда как другой взаимодействует только с 3′-гидроксильной группой ().Два иона металла соединены карбоксилатными группами двух остатков аспартата в пальмовом домене полимеразы. Эти боковые цепи удерживают ионы металлов в правильном положении и ориентации. Ион металла, связанный с праймером, активирует 3′-гидроксильную группу праймера, облегчая его атаку на α-фосфатную группу субстрата dNTP в активном центре. Два иона металла вместе помогают стабилизировать отрицательный заряд, который накапливается в пентакоординированном переходном состоянии. Ион металла, первоначально связанный с dNTP, стабилизирует отрицательный заряд пирофосфатного продукта.
Рисунок 27.12
Механизм ДНК-полимеразы. В ДНК-полимеразной реакции участвуют два иона металла (обычно Mg 2+ ). Один ион металла координирует 3′-гидроксильную группу праймера, тогда как фосфатная группа нуклеозидтрифосфатного мостика соединяет (подробнее …)
27.2.3. Специфичность репликации продиктована водородной связью, и комплементарность формы между основаниями
ДНК должна реплицироваться с высокой точностью. Каждое основание, добавляемое к растущей цепи, с высокой вероятностью должно быть дополнением Уотсона-Крика к основанию в соответствующем положении в цепочке-шаблоне.Связыванию NTP, содержащего подходящее основание, способствует образование пары оснований, которая стабилизируется специфическими водородными связями. Связывание некомплементарного основания маловероятно, поскольку взаимодействия неблагоприятны. Водородные связи, связывающие два комплементарных основания, вносят значительный вклад в точность репликации ДНК. Однако ДНК-полимеразы точнее реплицируют ДНК, чем можно объяснить только этими взаимодействиями.
Исследование кристаллических структур различных ДНК-полимераз выявило несколько дополнительных механизмов, с помощью которых повышается точность репликации.Во-первых, остатки фермента образуют водородные связи со стороной малой бороздки пары оснований в активном центре (). В малой бороздке акцепторы водородной связи присутствуют в одних и тех же положениях для всех пар оснований Watson-Crick. Эти взаимодействия действуют как «линейка», которая измеряет, сформировалась ли правильно разнесенная пара оснований в активном сайте. Во-вторых, ДНК-полимеразы закрываются вокруг входящего NTP (). Связывание нуклеозидтрифосфата с активным сайтом ДНК-полимеразы запускает конформационное изменение: домен пальца вращается, образуя плотный карман, в который легко поместится только пара оснований правильной формы.Мутация консервативного остатка тирозина в верхней части кармана приводит к полимеразе, которая примерно в 40 раз более подвержена ошибкам, чем исходная полимераза.
Рисунок 27.13
Взаимодействия малых канавок. ДНК-полимеразы отдают две водородные связи парам оснований в малой бороздке. Акцепторы водородной связи присутствуют в этих двух положениях для всех пар оснований Watson-Crick, включая показанную пару оснований A-T.
Рисунок 27.14
Избирательность формы. Связывание нуклеозидтрифосфата (NTP) с ДНК-полимеразой вызывает конформационные изменения, создавая плотный карман для пары оснований, состоящей из NTP и его партнера на матричной цепи.Такое конформационное изменение (подробнее …)
27.2.4. Многие полимеразы корректируют недавно добавленные базисы и акцизные ошибки
Многие полимеразы дополнительно повышают точность воспроизведения за счет использования механизмов корректуры. Как уже отмечалось, фрагмент Кленова ДНК-полимеразы I E. coli включает экзонуклеазный домен, который не участвует в самой реакции полимеризации. Вместо этого этот домен удаляет несовпадающие нуклеотиды с 3′-конца ДНК путем гидролиза.Активный сайт экзонуклеазы находится на расстоянии 35 Å от активного сайта полимеразы, но он может быть достигнут недавно синтезированной полинуклеотидной цепью при соответствующих условиях. Механизм проверки основан на повышенной вероятности того, что конец растущей цепи с неправильно включенным нуклеотидом покинет сайт полимеразы и временно переместится на сайт экзонуклеазы ().
Рисунок 27.15
Вычитка. Растущая полинуклеотидная цепь иногда покидает сайт полимеразы ДНК-полимеразы I и мигрирует в сайт экзонуклеазы.Там последний добавленный нуклеотид удаляют гидролизом. Поскольку несовпадающие основания с большей вероятностью уйдут (подробнее …)
Как фермент определяет правильность вновь добавленного основания? Во-первых, неправильная основа не будет правильно сочетаться с прядью шаблона. Его более сильные структурные колебания, допускаемые более слабыми водородными связями, часто будут приводить вновь синтезированную цепь к сайту экзонуклеазы. Во-вторых, после добавления нового нуклеотида ДНК перемещается на одну пару оснований в фермент.Вновь образованная пара оснований должна иметь надлежащие размеры, чтобы соответствовать узлу плотного связывания и участвовать во взаимодействиях водородных связей в малой бороздке, аналогичных таковым в самом сайте полимеризации (см.). Действительно, дуплексная ДНК внутри фермента принимает структуру А-формы, обеспечивая свободный доступ к малой бороздке. Если введено неправильное основание, фермент останавливается, и пауза дает дополнительное время для миграции цепи к сайту экзонуклеазы. Однако за эту функцию редактирования приходится платить: ДНК-полимераза I удаляет приблизительно 1 правильный нуклеотид из 20 путем гидролиза.Хотя удаление правильных нуклеотидов является немного расточительным с точки зрения энергии, корректура увеличивает точность репликации примерно в 1000 раз.
27.2.5. Разделение цепей ДНК требует определенных геликаз и гидролиза АТФ
Для репликации двухцепочечной молекулы ДНК две цепи двойной спирали должны быть отделены друг от друга, по крайней мере, локально. Это разделение позволяет каждой цепи действовать как матрица, на которой может быть собрана новая полинуклеотидная цепь.Для длинных двухцепочечных молекул ДНК скорость спонтанного разделения цепей пренебрежимо мала в физиологических условиях. Специфические ферменты, названные геликазами , используют энергию гидролиза АТФ для разделения цепей.
Детальные механизмы геликазы все еще активно исследуются. Однако определение трехмерных структур нескольких геликаз было источником понимания. Например, бактериальная геликаза, называемая PcrA , включает четыре домена, в дальнейшем называемых доменами A1, A2, B1 и B2 ().Домен A1 содержит складку NTPазы P-петли, как и ожидалось из анализа аминокислотной последовательности. Этот домен участвует в связывании и гидролизе АТФ. Домен B1 гомологичен домену A1, но не имеет P-петли. Домены A2 и B2 имеют уникальную структуру.
Рисунок 27.16
Структура геликазы. Бактериальная геликаза PcrA включает четыре домена: A1, A2, B1 и B2. Домен A1 включает складку NTPазы P-петли, тогда как домен B1 имеет аналогичную общую структуру, но не имеет P-петли и не связывает нуклеотиды.Одноцепочечная (подробнее …)
На основе анализа набора кристаллических структур геликазы, связанных с аналогами нуклеотидов и соответствующими двух- и одноцепочечными молекулами ДНК, был предложен механизм действия этих ферментов (). Домены A1 и B1 способны связывать одноцепочечную ДНК. В отсутствие связанного АТФ оба домена связаны с ДНК. Связывание АТФ запускает конформационные изменения в P-петле и прилегающих областях, которые приводят к закрытию щели между этими двумя доменами.Чтобы добиться этого движения, домен A1 высвобождает ДНК и скользит по цепи ДНК, приближаясь к домену B1. Затем фермент катализирует гидролиз АТФ с образованием АДФ и ортофосфата. При выпуске продукта трещина между доменами A и B открывается. Однако в этом состоянии домен A1 сильнее захватывает ДНК, чем домен B1, поэтому ДНК тянется через домен B1 к домену A1. В результате фермент перемещается по цепи ДНК аналогично тому, как движется дюймовый червь.Что касается PcrA, фермент перемещается в направлении 3 ‘→ 5’. Когда геликаза сталкивается с областью двухцепочечной ДНК, она продолжает двигаться вдоль одной цепи и смещает противоположную цепь ДНК по мере продвижения. Взаимодействие со специфическими карманами на геликазе помогает дестабилизировать дуплекс ДНК, чему способствуют конформационные изменения, вызванные АТФ.
Рисунок 27.17
Геликазный механизм. Первоначально оба домена A1 и B1 PcrA связывают одноцепочечную ДНК. При связывании АТФ щель между этими доменами закрывается, и домен A1 скользит по ДНК.При гидролизе АТФ щель открывается, вытягивая ДНК из домена B1 (подробнее …)
Геликазы составляют большой и разнообразный класс ферментов. Некоторые из этих ферментов движутся в направлении 5 ‘→ 3’, тогда как другие раскручивают РНК, а не ДНК, и участвуют в таких процессах, как сплайсинг РНК и инициация трансляции мРНК. Сравнение аминокислотных последовательностей сотен этих ферментов показывает семь областей поразительной консервации (). Картирование этих областей на структуру PcrA показывает, что они выстилают АТФ-связывающий сайт и щель между двумя доменами, что согласуется с представлением о том, что другие геликазы претерпевают конформационные изменения, аналогичные тем, которые обнаруживаются в PcrA.Однако, в то время как PcrA, по-видимому, действует как мономер, другие члены класса геликаз действуют как олигомеры. Гексамерные структуры одной важной группы аналогичны структуре компонента F -1 АТФ-синтазы (Раздел 18.4.1), что указывает на потенциальное механистическое сходство.
Рисунок 27.18
Консервированные остатки среди Helicases. Сравнение аминокислотных последовательностей сотен геликаз выявило семь участков с сильной консервацией последовательностей (показаны цветом).При картировании в структуре PcrA эти консервативные области лежат вдоль (подробнее …)
праймера РНК в репликации ДНК: определение, функция и последовательность — Видео и стенограмма урока
Обзор репликации ДНК
Теперь, когда мы понимаем, как работает комплементарность в ДНК и РНК, мы можем начать понимать, как наши клетки при необходимости создают копии ДНК. Наши клетки стареют и постоянно нуждаются в замене новыми.Чтобы это произошло, клетка должна сначала сделать копию ДНК, прежде чем новая будет произведена путем деления клетки. Это гарантирует, что новая клетка будет иметь полный набор ДНК, найденный в каждой другой клетке. Репликация ДНК — это термин, обозначающий процесс, который копирует нашу ДНК до того, как будет создана новая клетка. Во время этого процесса ДНК сначала необходимо размотать или расстегнуть с комплементарной цепи. Затем каждая нить используется в качестве шаблона для создания нового комплементарного фрагмента ДНК. На представленном здесь рисунке красные нити ДНК представляют исходные фрагменты ДНК, а розовые нити обозначают новые дополнительные фрагменты ДНК, которые создаются во время репликации.
В конце репликации каждый набор ДНК состоит из одной исходной цепи и одной новой цепи.
Роль праймеров РНК
Во время репликации ДНК две части ДНК разделяются и используются для создания новых комплементарных цепей ДНК. ДНК-полимераза — это фермент, отвечающий за сборку новых цепей ДНК. Однако ДНК-полимераза может связываться с исходной ДНК только при наличии второй цепи.Это представляет проблему, поскольку исходные нити были отделены друг от друга, что привело к образованию одиночных цепей ДНК. Итак, прежде чем ДНК-полимераза сможет начать синтез новой ДНК, необходимо создать праймер . Как правило, праймер — это короткий сегмент ДНК или РНК, необходимый для синтеза ДНК.
При репликации ДНК праймер представляет собой комплементарную цепь РНК, показанную синим цветом, которая связывается с исходной цепью ДНК, показанной красным. Создав небольшой сегмент комплементарных нуклеотидов, ДНК-полимераза теперь имеет сайт, с которым она может связываться.После создания праймера РНК ДНК-полимераза свяжется с ним и начнет создавать новую цепь ДНК, добавляя к праймеру комплементарные нуклеотиды. На рисунке показаны исходная ДНК, праймеры РНК и новая комплементарная ДНК.
После того, как ДНК-полимераза завершит построение новой ДНК, придет другой фермент и удалит праймеры РНК, прежде чем заменить их комплементарными нуклеотидами ДНК. В конце этого процесса все, что остается, — это две копии без какой-либо РНК.
Итоги урока
Давайте рассмотрим. И ДНК, и РНК состоят из определенных нуклеотидов , которые действуют как строительные блоки генетического кода. Каждый нуклеотид имеет еще комплементарный нуклеотид, с которым он спарен. В ДНК аденин соединяется с тимином, а гуанин — с цитозином. В РНК аденин соединяется с урацилом, а гуанин — с цитозином. Во время репликации ДНК две исходные комплементарные цепи ДНК разделяются, и каждая используется в качестве матрицы для создания новой ДНК. ДНК-полимераза — фермент, отвечающий за построение новой комплементарной ДНК. Однако для этого требуется наличие праймера РНК , который служит отправной точкой для репликации. Каждый праймер представляет собой короткий фрагмент РНК, комплементарный исходной цепи ДНК. Без праймера ДНК-полимераза не может копировать ДНК. Короче говоря, праймеры РНК служат стартовым сайтом для ДНК-полимеразы, когда ДНК необходимо скопировать. После копирования ДНК праймеры больше не нужны и, следовательно, удаляются.
Синтез ДНК
Синтез ДНКСинтез ДНК
Открытие двойная спираль ДНК Уотсон и Крик объяснили, как генетическая информация можно копировать и передавать последующим поколениям. Нити двойная спираль может разделяться и служить шаблонами для синтеза дочерних пряди. При консервативной репликации две дочерние нити переходят в одну дочерняя ячейка и две родительские нити перейдут в другую дочернюю ячейку.При полуконсервативной репликации одна родительская и одна дочерняя цепочки уйдут. каждой из дочерних клеток.
Путем экспериментов Было установлено, что ДНК реплицируется по полуконсервативному механизму. Там Есть три возможных механизма, которые могут объяснить полуконсервативную репликацию ДНК.
(a) Начинается синтез ДНК в определенном месте хромосомы, называемом происхождением. В первом механизме одна дочерняя цепь инициируется в начале одной родительской цепи, а второй инициируется в другом источнике на противоположной родительской цепи.Таким образом только одна прядь растет из каждого источника. Некоторые вирусы используют этот тип механизма.
(б) Во втором механизме репликация обеих цепей инициируется в одном источнике. Сайт, на котором две нити реплицируются, это называется вилкой репликации. Поскольку вилка движется в одном направлении от источника этот тип репликации называется однонаправленной. Некоторые виды бактерий используют этот тип механизма.
(c) В третьем механизме две репликационные вилки инициируются в ориджине и по мере продолжения синтеза две вилки отодвигаются друг от друга.Этот тип репликации называется двунаправленный. Большинство организмов, включая млекопитающих, используют двунаправленную репликацию.
Требования для синтеза ДНК
Есть четыре основных компоненты, необходимые для инициирования и распространения синтеза ДНК. Это: субстраты, шаблон, праймер и ферменты.
Подложки
Четыре дезоксирибонуклеотида трифосфаты (dNTP) необходимы для синтеза ДНК (обратите внимание на единственную разницу между дезоксирибонуклеотидами и рибонуклеотидами — отсутствие группы ОН в позиции 2 ‘на рибозном кольце).Это dATP, dGTP, dTTP и dCTP. В высокоэнергетическая фосфатная связь между a и b фосфаты расщепляются, и дезоксинуклеотидмонофосфат включается в новую цепь ДНК.
Рибонуклеозидтрифосфаты (NTP) также необходимы для инициирования и поддержания Синтез ДНК. NTP используются в синтезе праймеров РНК, а АТФ используется в качестве источника энергии для некоторых ферментов, необходимых для инициации и поддержания ДНК синтез на вилке репликации.
Шаблон
Выбран нуклеотид, который должен быть включен в растущую цепь ДНК. путем спаривания оснований с цепью матрицы ДНК. Шаблон — это ДНК нить, которая копируется в комплементарную цепь ДНК.
Праймер
Фермент, синтезирующий ДНК, ДНК-полимеразу, может только добавлять нуклеотиды к уже существующая цепь или праймер ДНК или РНК, которая спарена с основанием шаблон.
Ферменты
Фермент, ДНК-полимераза, необходим для ковалентного соединения входящих нуклеотид к праймеру. Чтобы действительно инициировать и поддерживать репликацию ДНК, требуется многие другие белки и ферменты, которые собираются в большой комплекс, называемый реплицирующий. Считается, что ДНК скручивается через реплисому и реплицируется. как он проходит.
Синтез ДНК, от 5 ‘до 3’
Основная каталитическая стадия синтеза ДНК показана ниже.Обратите внимание, что синтез ДНК всегда происходит в направлении от 5 ‘к 3’, и что входящий нуклеотид первым пары оснований с матрицей и затем связываются с нуклеотидом на праймере.
Синтез ДНК полунепрерывный
Поскольку все известные ДНК-полимеразы могут синтезироваться только в направлении от 5 ‘до 3’ Проблема возникает при попытке воспроизвести две цепи ДНК на вилке.
Обратите внимание, что верхняя нить должна прерывисто воспроизводиться короткими отрезками. таким образом, репликация обеих родительских цепей является полунепрерывным процессом.Непрерывно синтезируемая нить называется ведущей нитью, в то время как нить, которая синтезируется прерывисто, называется отстающей нитью.
Синтез ведущей нити
Для синтеза ДНКтребуется праймер, обычно сделанный из РНК. Примаза синтезирует рибонуклеотидный праймер длиной от 4 до 12 нуклеотидов. ДНК-полимераза затем включает dNMP на 3′-конец праймера, инициирующего ведущую цепь синтез.Только один праймер требуется для инициации и размножения синтез ведущей цепи.
Синтез отстающих цепей
Синтез отстающей цепи намного сложнее и включает пять этапов.
1. Поскольку ведущая цепь синтезируется вдоль нижней родительской цепи, обнажается верхняя родительская прядь. Затем прядь распознается примазой. который синтезирует короткий праймер РНК.
2. Затем ДНК-полимераза включает dNMP на 3-дюймовом конце праймера. и инициирует синтез отстающей цепи. Полимераза удлиняет грунтовку около 1000 нуклеотидов, пока он не войдет в контакт с 5′-концом предыдущая грунтовка. Эти короткие сегменты РНК / ДНК известны как фрагменты Окадзаки.
3. Когда ДНК-полимераза сталкивается с предыдущим праймером, она диссоциирует. Затем РНК удаляется специальной ДНК-полимеразой или ферментом, называемым RNaseH.Затем рибонуклеотиды вырезают по одному в направлении от 5 ‘до 3’. РНКаза H оставляет фосфатную группу на 5′-конце прилегающего сегмента ДНК. таким образом оставляя пробел.
4. Пробел заполняется ДНК-полимеразой, которая использует фрагмент Окадзаки в качестве грунтовка.
5. 3′-гидроксильная группа на 3′-конце нуклеотида ковалентно присоединился, используя ДНК-лигазу, к свободному 5 ‘фосфату ранее полученного отстающий сегмент.
Структура ДНК
ДНК-полимеразы
Существует много типов ДНК-полимераз, которые могут вырезать, заполнять пробелы, корректировать ремонтировать и воспроизводить.
Другие факторы, необходимые для синтеза ДНК
Происхождение: Происхождение — это уникальные последовательности ДНК, которые распознаются белком. что строит реплисому.Происхождение было обнаружено в бактериальных, плазмидных, вирусных, ДНК дрожжей и митохондрий и недавно были обнаружены в ДНК млекопитающих. Конкретные источники используются для инициации репликации ДНК у людей. Большинство истоков имеют сайт, который распознается и связывается белком, связывающим источник. Когда белок, связывающий ориджин, связывается с источником, богатая A + T последовательность становится частично денатурированы, позволяя другим факторам репликации, известным как цис-действующие факторы, связывают и инициируют репликацию ДНК.
Связывающий с источником белок : связывает и частично денатурирует исходную ДНК при связывании с другим ферментом, называемым геликазой.
Геликазы : разматывающая двухцепочечная ДНК.
Белок, связывающий одноцепочечную ДНК (SSB) : усиливает активность геликазы и предотвращает ренатурацию размотанной ДНК.
Primase : синтезировать праймеры РНК, необходимые для инициирования ведущей и синтез отстающей цепи.
ДНК-полимераза : распознает праймеры РНК и удлиняет их в 5 ‘ в направлении 3 ‘.
Факторы процессивности : помогают загрузить полимеразу на праймер-шаблон при закреплении полимеразы в ДНК.
Топоизомераза : удаляет положительные суперспирали, образующие вилку разматывается геликазом.
РНКаза H : удаляет части РНК из фрагментов Окадзаки.
Лигаза : запечатывает зарубки после заполнения пробелов, оставленных ДНК-полимеразой.
Координация синтеза ведущей и запаздывающей цепей
Считается, что синтез ведущей и отстающей цепи координируется при репликации вилка. Две полимеразы удерживаются вместе другим набором белков, tg, которые находятся рядом с разматываемой вилкой и одновременно заряжаются геликазой-примазой. Обе полимеразы связаны фактором процессивности b.После завершения фрагмента Окадзаки полимераза отстающей цепи высвобождает b-фактор и отделяется от ДНК. ТГ комплекс затем загружает новый комплекс b-фактор / праймер на полимеразу отстающей цепи, которая инициирует новый раунд …..
Теломераза
Синтез ведущей цепи может продолжаться до конца хромосомы однако синтез запаздывающей цепи не может. Следовательно, 3 подсказки каждой дочери хромосома не будет реплицирована.
Теломераза (также известная как терминальная трансфераза теломер) удлиняет 3′-концы хромосомы путем добавления многочисленных повторов последовательности из шести пар оснований до тех пор, пока 3 ‘конец отстающей цепи достаточно длинный, чтобы быть примированным и удлиняемым ДНК. полимераза.
Теломераза распознает кончики хромосом, также известные как теломеры. ДНК Последовательности теломер были определены у нескольких организмов и состоят из из многочисленных повторов последовательности длиной от 6 до 8 оснований, [TTGGGG] n.
Теломеры постепенно укорачиваются в определенных типах клеток. Эти клетки, по-видимому, лишены активности теломеразы. Когда длина теломеры укорачивается до критической точки клетка умирает. Клетки, полученные из быстро пролиферирующих ткани, например опухоли, имеют необычно длинные теломеры. Это указывает что активность теломеразы может быть необходима для пролиферации опухолевых клеток. Теломеразная активность обнаруживается в раковых клетках яичников, но не в нормальных яичниках. ткань.Таким образом, возможно, удастся разработать противоопухолевые препараты, которые ингибируют теломеразу. Мероприятия.
Теломераза
Химические ингибиторы репликации ДНК
Некоторые типы лекарств действуют, подавляя репликацию ДНК.
Аналоги субстрата : аналоги dNTP, которые функционируют как цепочка терминаторы могут быть включены в ДНК. Эти аналоги обычно либо отсутствуют. 3′-гидроксильная группа или иметь химическую группу, отличную от гидроксила, в 3 ‘позиция.
Цитозин арабинозид : противораковое средство, используемое для лечения лейкемии.
Азидотимидин (AZT) : использовался в качестве лекарственного средства против ВИЧ, которое, хотя и было эффективным в экспериментах на тканевых культурах, оказалось неэффективным для лечения ВИЧ у люди.
Ацикловир : эффективное лекарство от вируса герпеса.
Интеркалирующие агенты : соединения с конденсированным ароматическим кольцом системы, которые могут вклиниваться (интеркалировать) между сложенными парами оснований ДНК.Это нарушает структуру ДНК, поэтому репликативные ферменты сложность синтеза ДНК за «интеркалированными» сайтами. Антрациклин гликозиды и актиномицин D являются интеркаляторами, используемыми для лечения различных видов рака.
Агенты, повреждающие ДНК : различные соединения, такие как цисплатин, вызывают химическое повреждение ДНК и используются при лечении рака.
Ингибиторы топоизомеразы : Налидиксовая кислота и фторхинолоны антибиотики, используемые для подавления бактериальных топоизомераз.
© Доктор Ноэль Штурм 2019
Заявление об ограничении ответственности: Взгляды и мнения, выраженные на неофициальных страницах штата Калифорния Университет, преподаватели, сотрудники или студенты университета Домингес Хиллс являются строго такими же авторы страницы. Содержание этих страниц не проверялось или одобрен Калифорнийским государственным университетом, Домингес-Хиллз.
Addgene: Protocol — How to Design Primers
Primer Design for PCR
Олигонуклеотидные праймеры необходимы при проведении реакции ПЦР.Необходимо разработать праймеры, комплементарные матричной области ДНК. Они синтезируются химическим путем путем соединения нуклеотидов. При добавлении нуклеотида по одному необходимо выборочно блокировать и многократно разблокировать реактивные группы на нуклеотиде. Основное свойство праймеров состоит в том, что они должны соответствовать последовательностям в матричной молекуле (должны быть комплементарны цепи матрицы). Однако необязательно, чтобы праймеры полностью соответствовали цепи матрицы; однако важно, чтобы 3 ’конец праймера полностью соответствовал цепи матричной ДНК, чтобы можно было продолжить удлинение.Обычно гуанин или цитозин используют на 3 ’конце, а 5’ конец праймера обычно имеет участки в несколько нуклеотидов. Кроме того, оба 3 ’конца гибридизированных праймеров должны указывать друг на друга.
Размер грунтовки также очень важен. Короткие праймеры в основном используются для амплификации небольшого простого фрагмента ДНК. С другой стороны, длинный праймер используется для амплификации образца геномной ДНК эукариот. Однако праймер не должен быть слишком длинным (> 30-членные праймеры) или слишком коротким.Короткие праймеры производят неточный, неспецифический продукт амплификации ДНК, а длинные праймеры приводят к более медленной скорости гибридизации. В среднем фрагмент ДНК, который необходимо амплифицировать, должен иметь размер в пределах 1–10 кБ.
Структура грунтовки должна быть относительно простой и не содержать внутренней вторичной структуры, чтобы избежать внутреннего складывания. Также необходимо избегать отжига праймер-праймер, который создает димеры праймеров и нарушает процесс амплификации. При разработке, если не уверены в том, какой нуклеотид поместить в определенное положение внутри праймера, можно включить более одного нуклеотида в это положение, называемое смешанным сайтом.Можно также использовать молекулярную вставку на основе нуклеотида (инозин) вместо обычного нуклеотида для более широких возможностей спаривания.
Принимая во внимание вышеизложенную информацию, грунтовки обычно должны иметь следующие свойства:
- Длина 18-24 баз
- 40-60% содержание G / C
- Начало и конец с 1-2 парами G / C
- Температура плавления (Tm) 50-60 ° C
- Пары праймеров должны иметь Tm в пределах 5 ° C друг от друга
Пары праймеров не должны иметь дополнительных участков
Примечание: Если вы будете включать сайт рестрикции на 5 ’конце вашего праймера, обратите внимание, что« зажим »из 3-6 пар оснований должен быть добавлен выше по течению, чтобы фермент эффективно расщеплялся (например,грамм. GCGGCG-сайт рестрикции-ваша последовательность).